雞胚不同組織細胞的體外培養(yǎng)及永生化.pdf

1、雞胚永生化細胞系可用于病理學診斷、疫苗生產(chǎn)及其效力與安全性檢測。鑒于目前國內(nèi)還沒有該細胞系的建立,本研究通過體外培養(yǎng)雞胚不同的組織細胞,對其基本生物特性進行了測定,并采用物理、化學及細胞融合等方法,體外誘導雞胚各組織細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化,建立雞胚永生化細胞系。
　　 研究中取雞胚軀體來源細胞(Body Tissue Cells,BTC)、心臟來源細胞(Heart Tissue Cells,HTC),肺來源細胞(Lung Tissue C

2、ells,LTC)進行體外培養(yǎng)及細胞凍存。對上述細胞的形態(tài)學特點、生長曲線、分裂指數(shù)、染色體核型等指標進行了綜合分析。
　　 采用刮除法和相差消化法,從上述三種組織細胞中分離純化了以上相應組織細胞。純化的細胞大小相近,形態(tài)相似,生長特性一致。用DAPi染色對分離純化得到的細胞進行進一步的形態(tài)鑒定及支原體污染檢測。用抗波形蛋白單克隆抗體、抗結(jié)蛋白單克隆抗體、抗角蛋白-19單克隆抗體對BTC、HTC、LTC細胞分別做了免疫組化鑒定,

3、檢測得出BTC為成纖維細胞、HTC為成肌細胞、LTC為上皮類細胞。
　　 用MNNG、疊氮鈉及紫外線誘導雞胚不同組織的三、四代細胞,計算半致死劑量。篩選誘導后的細胞,并長期傳代培養(yǎng)和凍存,其中有兩株細胞(BTC、HTC)分別傳代到第36代和29代。
　　 探索不同分子量、不同濃度的PEG作融合劑對誘導癌細胞與雞胚體細胞融合的最適條件,在HAT選擇培養(yǎng)基下篩選融合細胞,得到雜交瘤細胞。對其進行克隆和傳代培養(yǎng)后,雜交細胞生長