2 型糖尿病脂聯素表達水平與乳腺癌發(fā)生的相關性研究.pdf

1、第一部分：糖尿病大鼠脂聯素表達水平的變化及西格列汀干預研究
　　背景：脂聯素（Adiponection）是主要由脂肪組織分泌的一種細胞因子，參與調節(jié)糖脂代謝，改善胰島素抵抗(IR)，脂聯素水平的下降可加重胰島素抵抗，從而導致相關的疾病如代謝綜合征、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝的發(fā)生發(fā)展[1]。西格列汀作為二肽基肽酶-4(DPP-IV)抑制劑之一，刺激胰島β細胞產生和分泌胰島素，改善胰島β細胞對葡萄糖的反應性，抑制胰島α細胞分泌胰高糖

2、素，抑制內源性葡萄糖的生成，綜合作用從而降低血糖。
　　目的：了解肥胖糖尿病大鼠血清脂聯素水平及腎周脂肪、骨骼肌、肝臟組織脂聯素表達水平，并觀察西格列汀干預對糖尿病大鼠糖脂代謝的影響及脂聯素在三種組織中表達的變化。
　　方法：將60只普通級雄性SD大鼠隨機分為高脂飲食喂養(yǎng)組(HD組，n=45)和普通飼料喂養(yǎng)組(NC組，n=15)。12周后，經高脂飲食喂養(yǎng)成功建立肥胖模型(n=35)，隨機留取肥胖對照組(OB組，n=8)。其余

3、肥胖大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）35 mg/kg。肥胖DM大鼠造模成功(n=20)后，再隨機分為2組：DM對照組（DM組，n=10），西格列汀干預組（SP組，n=10）。采用ELISA法分別測定干預前后各組大鼠血清脂聯素水平和體質量(BW)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)，再計算胰島素敏感指數（HOMA-β）及胰島素抵抗指數(HOMA-IR)，采用 W

4、estern blot法檢測NC組、DM組和SP組的大鼠骨骼肌、腎周脂肪、和肝臟脂聯素蛋白表達水平。
　　1.成功建立肥胖大鼠模型和肥胖糖尿病大鼠模型。
　　2.各組生化指標比較:
　　⑴西格列汀干預前，與NC組相比，OB組BW、FINS、HOMA-IR、 LDL-C均升高，HOMA-β降低(均P<0.05)，但FBG、TG、TC無明顯升高(P＞0.05)；DM組和SP組BW、FBG、FINS、HOMA-IR、TG、T

5、C、LDL-C、FINS均升高，HOMA-β降低，差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。與OB組相比，DM組和SP組的FBG、HOMA-IR、TG升高(均P<0.05)；但DM組和SP組兩組之間上述指標差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　?、铺悄虿〈笫蠼o予西格列汀干預后，與NC組相比，SP組大鼠FBG、FINS升高，HOMA-β下降，有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)。與DM組相比，SP組大鼠的FBG、TG、LDL-C、FINS、HO

6、MA-IR下降，差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，HOMA-β輕度升高，BW有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與OB組相比，SP組BW、FINS、HOMA-IR下降，差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。
　　3．血清脂聯素水平的變化
　?、盼鞲窳型「深A前，與NC組相比，DM組、SP組和OB組脂聯素水平均下降，差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，但DM組和SP組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；
　?、?/p>

7、西格列汀干預后，SP組的脂聯素水平上升，與DM對照組和OB組有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)，與NC組無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；OB組的脂聯素水平與NC組和SP組差異有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)，與DM組差異無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　4.組織脂聯素表達水平的變化：與NC組相比，DM組與SP組大鼠腎周脂肪、肝臟組織、肌肉組織脂聯素的表達量減少（均P<0.05）；與DM組相比，SP組大鼠肝臟組織、肌肉組織的脂聯素蛋白表達

8、量增加（均P<0.05），腎周脂肪組織脂聯素蛋白表達量有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　5.相關性分析顯示西格列汀干預后脂聯素與BW、TG、TC、LDL-C、FBG、FINS及HOMO-IR、HOMA-β始終獨立相關（P<0.05）。
　　結論：
　　肥胖大鼠及肥胖糖尿病大鼠血清脂聯素水平降低，腎周、肝臟及肌肉組織脂聯素蛋白表達水平下降。西格列汀干預可改善糖尿病大鼠的糖脂代謝，升高血清脂聯素水平，且

9、提高肌肉及肝臟組織中脂聯素蛋白表達水平。
　　第二部分：脂聯素在2型糖尿病乳腺癌發(fā)病機制中可能作用
　　背景：
　　眾多研究表明，在糖尿病女性人群中乳腺癌患病率明顯增加，特別是在肥胖患者中。其確切機制尚不明確，近年來的多項研究表明脂肪因子表達分泌異常起重要作用。脂聯素是一種重要的脂肪因子，目前認為脂聯素與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。本研究擬通過收集2型糖尿病伴乳腺癌和非糖尿病乳腺癌患者的血清和乳腺癌組織、癌旁組織標本及相

10、關臨床資料，觀察正常血糖和糖尿病患者乳腺癌組織細胞周期相關指標晚期糖基化終末產物受體（RAGE）、G1/S特異性周期蛋白-D1(Cyclin D1)和核轉錄因子（NF-κB）表達的差異，分析脂聯素與它們表達的相關性，探討脂聯素參與2型糖尿病乳腺癌發(fā)病的可能機制。
　　目的：
　　了解2型糖尿病伴乳腺癌與非糖尿病乳腺癌患者血清脂聯素水平的差異；兩組患者癌組織、癌旁組織脂聯素、RAGE、Cyclin D1和NF-κB表達的差異，

11、分析脂聯素與三種指標表達的相關性，探討脂聯素參與2型糖尿病患者乳腺癌發(fā)生的可能途徑及機制，從而為降低2型糖尿病患乳腺癌風險及治療提供依據。
　　方法：
　　1.納入20例2型糖尿病伴乳腺癌患者和30例非糖尿病乳腺癌患者，采集臨床資料，抽取靜脈血5ml，檢測空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、血清膽固醇（TC）、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總脂聯素(Adipon

12、ectin)、高分子量脂聯素水平(HMW adiponectin)，并計算HOMA-IR。
　　2.2組患者手術時，切取適量癌組織及癌旁3cm以外的正常乳腺組織；合并糖尿病的乳腺癌患者癌組織歸為DBCC組，正常乳腺組織為DBCN組，單純乳腺癌患者的癌組織為 BCC組，正常乳腺組織為 BCN組。采用 Western Blot和qRT-PCR檢測脂聯素、RAGE、Cyclin D1和NF-κB蛋白和mRNA表達水平。
　　結果：

13、
　　1.兩組患者一般情況與腫瘤分期的比較：兩組研究對象之間年齡、體重指數均無明顯差異（P>0.05），但合并糖尿病組患者年齡偏大；兩組研究對象之間腫瘤大小存在統(tǒng)計學差異（P<0.05），合并糖尿病的乳腺癌患者腫瘤大小的分期級別更高；但是兩組之間腫瘤淋巴轉移情況及遠處轉移情況無明顯差異（P>0.05）。2.兩組患者之間血清學指標的比較：兩組研究對象之間血清TG水平、HOMA-IR存在統(tǒng)計學差異（P<0.05），合并糖尿病的乳腺癌患

14、者血清TG水平及HOMA-IR更高；兩組之間比較，合并糖尿病的乳腺癌患者血清HDL水平、血清脂聯素水平及血清高分子量脂聯素水平較低，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；兩組研究對象血清TC水平與血清LDL水平無明顯差異（P>0.05）。
　　3.相關性分析：pearson相關分析顯示血清總脂聯素水平與血清高分子量脂聯素水平均與BMI及HDL水平無相關性（P>0.05），與HOMA-IR呈負相關（P<0.05），與血清TG水平呈正相

15、關（P<0.05）；spearman相關分析顯示血清總脂聯素水平、血清高分子量脂聯素水平均與腫瘤大小呈負相關（P<0.05）。
　　4.組織學指標檢測結果：免疫組化及Western blot技術用于四組不同組織RAGE蛋白表達量的檢測，結果顯示DBCC組RAGE蛋白表達量高于BCC組及DBCN組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；BCN組RAGE蛋白表達量明顯低于DBCN及BCC組
　　(P<0.05)。Western b

16、lot和qPCR技術用于四組不同組織蛋白NF-κB和 CyclinD1蛋白及mRNA表達量的檢測，結果顯示DBCC組NF-κB和CyclinD1蛋白及mRNA表達量均高于BCC組和DBCN組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，DBCN組與BCN組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；脂聯素蛋白和mRNA表達量在DBCC組顯著降低于DBCN、BCC和BCN組(P<0.05)。
　　5.組織學指標RAGE、NF-κB及cyclinD

17、1蛋白表達量線性相關分析：cyclinD1的表達量與RAGE表達量呈正相關(R=0.931, P<0.001)，但NF-κB的表達量與RAGE表達量之間無明顯相關關系（P>0.05）。
　　6.血清總脂聯素、高分子量脂聯素與組織學指標的相關性分析：pearson相關分析顯示血清總脂聯素水平與RAGE、Cyclin D1、NF-κB表達水平顯著負相關（P<0.05），血清高分子量脂聯素水平與RAGE、NF-κB表達水平顯著負相關（P

18、<0.05），與Cyclin D1表達水平無明顯相關（P>0.05）。
　　7.乳腺癌組織脂聯素表達與RAGE、NF-κB及cyclinD1表達量相關分析：腫瘤組織脂聯素表達量與RAGE、CyclinD1及NF-κB表達均呈負相關（P<0.05）。
　　結論：
　　1.合并糖尿病的乳腺癌患者腫瘤大小的分期級別更高。
　　2.合并糖尿病的乳腺癌患者血清HDL-C水平、血清總脂聯素水平及血清高分子量脂聯素水平降低，提

19、示脂聯素可能是糖尿病患者乳腺癌發(fā)生的保護因素。
　　3.糖尿病伴乳腺癌患者 RAGE、Cyclin D1、NF-κB表達明顯增高,脂聯素的表達下降，提示細胞增殖周期的異常參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，而脂聯素參與調控細胞增殖周期。
　　4.血清總脂聯素、高分子量脂聯素水平與 RAGE、NF-κB表達呈負相關，組織脂聯素表達與RAGE、NF-κB和Cyclin D1表達負相關，提示脂聯素可能通過調節(jié)RAGE-NF-κB信號通路調控糖尿