MCM5基因的克隆和真核表達(dá)及其與P53相互作用的鑒定.pdf

1、P53 曾被稱為“cellular gatekeeper”(Levine，1997)和“the guardian of the genome ”(Lane，1992)，因?yàn)樗趨f(xié)調(diào)和整合細(xì)胞對(duì)多種外界脅迫因子的應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。P53像一個(gè)負(fù)責(zé)處理和整合信息然后發(fā)號(hào)施令的樞紐和控制中心，根據(jù)細(xì)胞面臨的脅迫刺激的種類和刺激強(qiáng)度的差異，啟動(dòng)不同的下游信號(hào)通路，從而決定細(xì)胞的應(yīng)答方式，即細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期阻滯，細(xì)胞衰老，DNA損傷修復(fù)

2、，細(xì)胞代謝狀態(tài)改變或發(fā)生自噬。
　　 不同的脅迫刺激條件可以使p53發(fā)生不同形式的翻譯后修飾變化，進(jìn)而引起一系列的細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)。P53蛋白包括了N端（氨基端）富含脯氨酸的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域，DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，四聚化結(jié)構(gòu)域和C端（羧基端）結(jié)構(gòu)域。P53應(yīng)答多種脅迫條件而進(jìn)行的翻譯后修飾主要發(fā)生在p53蛋白分子的N端。雖然p53的某些生物學(xué)效應(yīng)與轉(zhuǎn)錄功能無(wú)關(guān)，但p53對(duì)其靶基因的轉(zhuǎn)錄激活是細(xì)胞應(yīng)答各種脅迫刺激的一種非常重要的方式。而p5

3、3蛋白的氨基端不僅與其轉(zhuǎn)錄激活有關(guān)，還參與了p53與MDM2的相互作用。除MDM2外，還有很多p53相互作用蛋白都可以影響p53的穩(wěn)定性。
　　 為了尋找新的可能調(diào)節(jié)p53轉(zhuǎn)錄激活的蛋白，利用包含了人源p53蛋白氨基端60個(gè)氨基酸的融合蛋白GST-p53N60與HeLa細(xì)胞裂解液進(jìn)行GST pull-down實(shí)驗(yàn)，通過(guò)質(zhì)譜分析獲得了一個(gè)新的p53結(jié)合蛋白MCM5。MCM5作為一個(gè)DNA 復(fù)制調(diào)控蛋白，它是進(jìn)化保守的真核細(xì)胞微小染