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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討Akt抑制劑(AZD5363)聯(lián)合利妥昔單抗在體外對(duì)伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)增殖和凋亡的影響,并對(duì)相關(guān)的機(jī)制進(jìn)行探討,為臨床采用利妥昔單抗聯(lián)合Akt抑制劑靶向治療BL提供理論依據(jù)。
方法:
1.體外培養(yǎng)人Daudi細(xì)胞,采用CCK8法檢測(cè)不同濃度AZD5363、利妥昔單抗作用24h對(duì)Daudi細(xì)胞增殖的影響。
2.選取AZD536340μmol/L及利妥昔單抗50μg
2、/mL做進(jìn)一步研究,實(shí)驗(yàn)分4組:陰性組、AZD5363組、利妥昔單抗組、聯(lián)合用藥組(AZD5363+利妥昔單抗),CCK8法檢測(cè)24、48、72小時(shí)后Daudi細(xì)胞的增殖情況及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)48、72小時(shí)后Daudi細(xì)胞的凋亡情況。
3.選取AZD536340μmol/L及利妥昔單抗50μg/mL做進(jìn)一步研究,實(shí)驗(yàn)分4組:陰性組、AZD5363組、利妥昔單抗組、聯(lián)合用藥組(AZD5363+利妥昔單抗),Western blot
3、(WB)方法檢測(cè)24h后Daudi細(xì)胞磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和總Akt(total—Akt,T-Akt)蛋白的表達(dá)情況。
4.用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
結(jié)果:
1、濃度為25、50、75、100ug/mL的利妥昔單抗作用于Daudi細(xì)胞24h后對(duì)應(yīng)的抑制率分別為16.35%、18.15%、21.89、24.36%,顯示利妥昔單抗在體外對(duì)Daudi細(xì)胞表現(xiàn)出較弱
4、的增殖抑制作用。
2、濃度為5、10、20、40及80μmol/L的AZD5363作用于Daudi細(xì)胞24h后對(duì)應(yīng)的抑制率分別為5.61%、13.42%、18.02%、21.32%、55.23%,在一定的濃度范圍內(nèi),隨著AZD5363的濃度加大,其抑制率增加。
3、聯(lián)合用藥組在24、48、72h時(shí)間點(diǎn)對(duì)Daudi細(xì)胞增殖抑制率分別為35.13%、44.73%、71.33%,顯著高于AZD5363組及利妥昔單抗組,差異
5、均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
4、聯(lián)合作用組作用于Daudi細(xì)胞48小時(shí)后凋亡率為47.21%,顯著高于AZD5363組(29.17%)及利妥昔單抗組(19.96%);聯(lián)合作用組作用于Da udi細(xì)胞72小時(shí)后凋亡率為65.23%,顯著高于AZD5363組(40.70%)及利妥昔單抗組(22.61%),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
5、AZD5363組、利妥昔單抗組及聯(lián)合用藥組Daudi細(xì)胞T-Akt
6、表達(dá)無顯著的差異(p>0.05);聯(lián)合用藥組Daudi細(xì)胞p-Akt表達(dá)明顯下調(diào)(0.18±0.04),并顯著低于AZD5363組(0.33±0.03)及利妥昔單抗組(0.45±0.04),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
結(jié)論:利妥昔單抗對(duì)BL細(xì)胞的增殖和凋亡影響較弱;Akt抑制劑AZD5363具有較強(qiáng)的抑制BL細(xì)胞增殖、促使細(xì)胞凋亡的作用,當(dāng)其與利妥昔單抗聯(lián)合應(yīng)用后,療效優(yōu)于單藥;其作用機(jī)制與Akt蛋白磷酸化水平下調(diào)
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