關(guān)于阻斷SDF-1-CXCR4信號(hào)通路在減緩骨性關(guān)節(jié)炎進(jìn)展中的研究.pdf

1、目的：
　　探索研究通過使用藥物AMD3100阻斷基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）/趨化因子受體4信號(hào)通路在豚鼠骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis, A）中的作用。
　　方法：
　?。?）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：本試驗(yàn)選取35只九個(gè)月大的雄性Hartley豚鼠（0.88公斤±0.21公斤），將其隨機(jī)分為三組：第1組通過滲透微泵連續(xù)輸注CXCR4拮抗劑AMD31

2、00/PBS溶液（N=13）；第2組主要作為未處理的OA控制組（N=11）；第3組通過滲透微泵持續(xù)輸注PBS溶液（n=11）。豚鼠使用含有0.2％甲苯噻嗪和1%氯胺酮的PBS溶液麻醉。所有豚鼠每周稱重，并在3個(gè)月（12周）的治療后實(shí)行安樂死，之后將所有豚鼠的膝關(guān)節(jié)通過仔細(xì)解剖后整體移除行組織學(xué)觀察。（2）體外實(shí)驗(yàn)部分則是預(yù)先將取出的 OA軟骨細(xì)胞和軟骨外植體分別放入含有一定量的SDF-1，siRNA CXCR4或者anti-CXCR4培

3、育基中進(jìn)行培育。隨后的標(biāo)本中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）mRNA和蛋白質(zhì)水平分別使用定時(shí)聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定。（3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理：作背外側(cè)胸部切口，并鈍性分離皮下后（~1厘米）形成皮下小袋，將微型滲透泵分別插入其中。插入前，200μL泵即儲(chǔ)滿44.44毫克/毫升AMD3100+ PBS溶液（組2）或單純PBS溶液（組3）。平均泵入速率為0.15μ升/小時(shí)，以此劑量第1組每只動(dòng)物每天將收到160

4、μg AMD3100。因滲透泵持續(xù)時(shí)間為6周，滲透泵在治療過程中需更換一次。（4）結(jié)果測(cè)定：軟骨破壞程度以改良 Mankin’s評(píng)分進(jìn)行評(píng)價(jià)。SDF-1,糖胺聚糖(GAGs), MMP-1, MMP-13和白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)使用ELISA染色測(cè)定。
　　結(jié)果：
　　SDF-1在較早的時(shí)間里即已完全浸潤(rùn)軟骨并且減少了蛋白聚糖的染色;在經(jīng)過含有SDF-1的培養(yǎng)基中，軟骨細(xì)胞及軟骨糖胺聚糖(GAGs)和MMP-13的活

5、性明顯增加。而在使用siRNA CXCR4或者CXCR4抗體干擾SDF-1和CXCR4之間的聯(lián)系后，SDF-1的效果則明顯被減弱。染色顯示，經(jīng)AMD-3100治療的實(shí)驗(yàn)組，其膝關(guān)節(jié)軟骨損傷的Mankin’s評(píng)分相較于對(duì)照組是最低的。同時(shí)，在經(jīng)AMD-3100治療的實(shí)驗(yàn)組中，SDF-1， GAG，MMP1，MMP-13，和IL-1β在關(guān)節(jié)液和血液中的的水平也明顯低于對(duì)照組。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)成功建立了原發(fā)性O(shè)A的豚鼠模型