丙烯酰胺對(duì)雄性大鼠生殖毒性的研究.pdf

1、丙烯酰胺(acrylamide，AA)為白色晶體物質(zhì)，是一種重要的化工原料，廣泛用于飲水凈化、污水處理、造紙、采礦業(yè)及科研實(shí)驗(yàn)等。丙烯酰胺可經(jīng)皮膚迅速吸收，是一種重要的職業(yè)接觸化合物。此外，丙烯酰胺主要在高碳水化合物、低蛋白質(zhì)的植物性食物加熱(120℃以上)烹調(diào)過程中形成，成為非職業(yè)人群暴露的一個(gè)重要途徑，因而引起廣泛的關(guān)注。人體還可能通過吸煙的途徑接觸丙烯酰胺。丙烯酰胺具有多種毒性，可影響雄性動(dòng)物生殖和發(fā)育，但其作用機(jī)制目前尚不清楚。

2、以往研究中多采用高劑量急性染毒，而對(duì)丙烯酰胺經(jīng)口長期染毒所產(chǎn)生的生殖毒性作用的報(bào)道較少。本研究采用亞慢性毒性試驗(yàn)，結(jié)合整體動(dòng)物研究和體外實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)研究了丙烯酰胺對(duì)雄性大鼠生殖機(jī)能、脂質(zhì)過氧化水平和睪丸生殖內(nèi)分泌功能的影響，旨在探究丙烯酰胺對(duì)雄性生殖及睪丸內(nèi)分泌功能活動(dòng)產(chǎn)生的影響，為進(jìn)一步研究丙烯酰胺對(duì)雄性生殖毒性作用及其機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。 一、丙烯酰胺對(duì)雄性大鼠生殖功能的影響 8周齡體重(200±10)g健康雄性SD大鼠

3、40只，隨機(jī)分成4組，每組10只。灌胃給予丙烯酰胺，劑量為0(對(duì)照組)、4、10、18 mg/kg.d，每周染毒6d，共染毒9周。觀察動(dòng)物一般情況、體重以及臟器系數(shù)的變化．染毒結(jié)束后，測(cè)量后肢支撐力，處死大鼠收集睪丸、附睪和血清。測(cè)定精子存活率、精子畸形率、睪丸勻漿中堿性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脫氫酶(LDH)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GT)活性。結(jié)果表明：隨著染毒劑量的增加，各劑量組與對(duì)照組比較，后肢展開距離顯著加寬

4、(P<0.01)，精子存活率顯著下降(P<0.01)。10 mg/kg.d和18 mg/kg.d劑量組精子畸形率明顯上升(P<0.05)。ACP活性呈下降趨勢(shì)，ALP活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，兩者的活性在18 mg/kg.d劑量組與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05)。LDH活性有下降的趨勢(shì)，γ-GT活性有上升的趨勢(shì)，但兩者各組間比較差異都不顯著(P>0.05)。 二、丙烯酰胺對(duì)雄性大鼠脂質(zhì)過氧化水平的影響 染毒結(jié)束后，

5、處死大鼠收集睪丸及其他臟器和血清，測(cè)定血清和睪丸勻漿中丙二醛(MDA)和還原型谷胱甘肽(GSH)水平以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。結(jié)果表明：各劑量組與對(duì)照組比較，血清中的GSH水平、MDA水平、GSHPx活性和SOD活性，無明顯差異(P>0.05)；而睪丸勻漿中GSH水平和sOD活性顯著下降(P<0.01)，GSHPx活性也顯著受到抑制(P<0.05)，MDA水平無顯著差異(P>0.05)。

6、 三、丙烯酰胺對(duì)雄性大鼠睪丸生殖內(nèi)分泌功能的影響 染毒結(jié)束后，測(cè)定血清和睪丸勻漿中睪酮(T)及17β-雌二醇(17β-E<,2>)濃度。分離純化睪丸Leydig細(xì)胞，建立睪丸Leydig細(xì)胞體外原代培養(yǎng)模型。Leydig細(xì)胞培養(yǎng)24h后，通過CCK-8法測(cè)定各劑量組Leydig細(xì)胞活性并測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液T濃度。體外丙烯酰胺染毒劑量分為對(duì)照(0mmol/L)、0.1、0.75、4、8mmol/L，同樣通過CCK-8法觀察Leydi

7、g細(xì)胞活性。結(jié)果表明：各染毒劑量組血清和睪丸勻漿中T顯著下降(P<0.05)，17 β-E<,2>水平無明顯差異，Leydig細(xì)胞活性明顯受到抑制(P<0.01)，細(xì)胞培養(yǎng)液T濃度顯著降低(P<0.01)。體外丙烯酰胺染毒24h后，Leydig細(xì)胞活性受到顯著抑制(P<0.01)。 以上結(jié)果表明亞慢性丙烯酰胺染毒損傷雄性生育能力，影響生精過程中有關(guān)一些特征酶活性，睪丸是丙烯酰胺毒性作用的重要靶器官，大鼠后肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性明顯受到影響