瓊膠酶高產(chǎn)菌株的篩選、酶的分離純化及紅藻原生質(zhì)體的酶法制備.pdf

1、海藻的原生質(zhì)體制備被廣泛應(yīng)用于生理學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)研究，也是海產(chǎn)品養(yǎng)殖、育種中的重要技術(shù)。而且，從原生質(zhì)體出發(fā)，可以制備多種對(duì)于科研和生產(chǎn)非常有價(jià)值的復(fù)合物。目前，海藻原生質(zhì)體的生產(chǎn)主要是使用海洋細(xì)菌所產(chǎn)解壁酶進(jìn)行酶法制備，這些酶包括纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和瓊膠酶等。 紅藻門包括多種形態(tài)、性質(zhì)各異的海藻，其細(xì)胞壁成分隨著生長(zhǎng)時(shí)期、生理狀態(tài)、培養(yǎng)條件的不同而處于動(dòng)態(tài)變化中。因此找到一種能有效降解紅藻細(xì)胞壁的酶以大量制備原生

2、質(zhì)體，就成為開(kāi)展紅藻相關(guān)研究的關(guān)鍵。紅藻細(xì)胞壁共有的主要成分是瓊膠——包括瓊脂糖和瓊脂膠，而瓊膠酶就是專一降解這種多糖的水解酶。 本文從在煙臺(tái)沿海采集的多種紅藻表面分離到一株高產(chǎn)瓊膠酶的革蘭氏陰性菌。該菌株不能降解纖維素和淀粉，也不能液化明膠。16SRNA分析表明其與Agarivorans sp.的同源性在99％以上，故命名為Agarivorans sp.SM0527。同時(shí)，本文對(duì)SM0527發(fā)酵產(chǎn)瓊膠酶的條件進(jìn)行了優(yōu)化：人工海

3、水配制，含瓊脂0.5％，酵母粉0.5％，發(fā)酵起始pH 7.0，500ml三角瓶中裝培養(yǎng)基100ml，接種量為5％，培養(yǎng)時(shí)間為60小時(shí)。在上述條件下，發(fā)酵液中瓊膠酶的酶活可達(dá)到3300IU/ml。發(fā)酵的粗酶液通過(guò)離心、硫酸銨沉淀和陰離子交換層析，得到一個(gè)分子量大約90kD的瓊膠酶。該酶最適反應(yīng)pH值為8.5，最適反應(yīng)溫度為45℃，最適反應(yīng)時(shí)間為10min。 本文使用SM0527所產(chǎn)的瓊膠酶及本試驗(yàn)室保存的擬康氏木霉Trichode