擬南芥ats1A基因啟動(dòng)子和ats2B基因啟動(dòng)子的克隆及其功能分析.pdf

1、近年來利用植物作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)目的產(chǎn)品成就矚目,正成為基因工程研究中新的熱點(diǎn).借助于高活性特異表達(dá)的啟動(dòng)子提高外源基因的表達(dá)量,以及使外源基因只在特定的發(fā)育階段在特定的組織或器官中表達(dá),成為植物生物反應(yīng)器研究的關(guān)鍵技術(shù)之一.Rubisco即核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(E.C.4.1.1.39.),是葉綠體中光合CO<,2>固定的關(guān)鍵酶也是葉綠體中含量最為豐富的蛋白,約占葉片可溶性蛋白的50%以上.ats1A基因和ats2B基

2、因是擬南芥中編碼Rubisco小亞基的兩個(gè)基因,這兩個(gè)基因位于細(xì)胞核中,對它們的調(diào)控元件、啟動(dòng)子活性和組織特異性的研究,為外源基因在植物中的特異高效表達(dá)提供一種新的途徑.另外,利用葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)信號肽將外源基因產(chǎn)物定位到葉綠體中可提高其積累水平,因而也是提高外源基因表達(dá)量的一種有效策略.該研究利用PCR克隆了擬南芥ats1A基因啟動(dòng)子和ats2B基因啟動(dòng)子(均包含葉綠體的轉(zhuǎn)運(yùn)信號肽),并對其序列進(jìn)行了分析,然后將ats1A基因啟動(dòng)子(包含葉

3、綠體的轉(zhuǎn)運(yùn)信號肽)構(gòu)建植物瞬時(shí)表達(dá)載體p18T-Gus,通過瞬時(shí)表達(dá)對其活性進(jìn)行了分析.通過以上研究工作,得到的主要研究結(jié)果如下:1.PCR方法克隆到了ats1A基因和ats2B基因的5′端上游片段(包含啟動(dòng)子部分和葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽),并分別構(gòu)建了克隆載體p18T1a和p18T2b.2.用植物順式作用元件數(shù)據(jù)庫分別對ats1A基因啟動(dòng)子和ats2B基因的啟動(dòng)子區(qū)的DNA順式作用元件進(jìn)行了分析.3.將ats1A基因啟動(dòng)子連接在Gus報(bào)告基因的