噬菌體展示技術篩選幽門螺旋桿菌單鏈抗體的研究.pdf

1、幽門螺旋桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori)于1983年由澳大利亞學者Warren和Marshall從慢性胃炎患者胃粘膜中成功分離出。H.pylori是一種革蘭氏陰性螺旋狀桿菌，在胃上皮細胞定居繁殖。大量研究證實，H.pylori是慢性胃炎、消化性潰瘍及胃腸道淋巴瘤的主要致病因素，并與胃癌發(fā)生密切相關。1994年國際癌癥研究中心(IARC)將H.pylori列為I類致癌因子。由于目前治療消化性潰瘍?nèi)?lián)治療法存在

2、著很多不足，因此能獲得針對H.pylori的特異性抗體成為現(xiàn)在眾多學者研究的熱點。 本文主要采用噬菌體展示技術首次從人源單鏈抗體文庫TomlinsonI+J中用細胞篩選法篩選抗H.pylori的抗體。直接用H.pylori細胞固定進行五輪篩選，通過ELISA檢測，第四輪篩選得到的含有單鏈抗體噬菌體在顯色值達到最高，為陰性對照的4倍；隨后，從隨機挑選的96個克隆中獲得了1株陽性克隆。再分別將陽性克隆與10種常見菌進行ELISA的

3、交叉反應，最終得到1株含H.pylori的人源性單鏈抗體的噬菌體JH1。隨后又進一步對JH1所表達的scFv基因進行PCR擴增，分別得到scFv的VH片段、VL片段和全長基因分別為527bp、368bp和935bp，這些包含著部分載體序列的DNA片段與理論值相符。通過對人源性單鏈抗體全基因進行測序，在NCBI中進行基因序列比對，與已報道的一種植物RNA病毒的復制酶單鏈抗體基因序列有96％同源性。 將陽性克隆JH1轉(zhuǎn)入E.col