生命早期鉛暴露對(duì)小鼠后期腦NMDAR影響及表觀遺傳機(jī)制研究.pdf

1、目的：⑴了解生命早期鉛暴露對(duì)小鼠后期海馬回NMDAR表達(dá)的影響。⑵了解生命早期鉛暴露對(duì)小鼠后期海馬回表觀遺傳學(xué)指標(biāo)DNMT1、miR-185、miR-219、miR-223表達(dá)的影響。⑶探討生命早期鉛暴露對(duì)小鼠后期海馬回表觀遺傳學(xué)指標(biāo)變化與NMDAR之間的關(guān)系。
　　方法：建立生命早期鉛暴露小鼠模型。在SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室條件下，成功受孕C57BL/6小鼠隨機(jī)分為暴露組（9只）和對(duì)照組（10只），暴露組母鼠于孕13d起予以0.2％的

2、醋酸鉛溶液飲用直至產(chǎn)后21d斷乳，對(duì)照組母鼠予以去離子水。ICP-MS法檢測(cè)各組產(chǎn)后21d子鼠血、腦鉛水平以判斷生命早期鉛暴露小鼠模型是否達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。
　　生命早期鉛暴露對(duì)小鼠后期海馬回NMDAR、DNMT1及miRNAs表達(dá)的影響。分別在產(chǎn)后4M和8M時(shí)，隨機(jī)抽取暴露組和對(duì)照組子鼠各12只，低溫環(huán)境下采集腦海馬回組織，用TriPure法提取總RNA，用莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用熒光定量PCR方法檢測(cè)NMDAR亞基NR1、NR2

3、A、NR2B及表觀遺傳學(xué)指標(biāo)DNMT1、miR-185、miR-219、miR-223的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：在產(chǎn)后21d時(shí)，暴露組子鼠血鉛濃度544.0μg/L，腦鉛濃度814.67μg/kg；對(duì)照組子鼠血鉛濃度16.5μg/L，腦鉛濃度7.32μg/kg。按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)預(yù)期，暴露組產(chǎn)后21d子鼠血鉛濃度可達(dá)到40～60μg/dL，以模擬中低水平鉛暴露的結(jié)果，而實(shí)際造模血鉛濃度為54.40μg/dL，符合實(shí)驗(yàn)要求，證實(shí)造模成功。

4、r>　　通過(guò)孕期和哺乳期鉛暴露的子鼠，在產(chǎn)后4M和8M時(shí)，其海馬回NMDAR亞基NR1、NR2A、NR2B表達(dá)水平，除8M時(shí)NR1外，均較低于對(duì)照組，其中4M時(shí)NR2A、NR2B有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；表觀遺傳學(xué)指標(biāo)DNMT1、miR-185、miR-219、miR-223表達(dá)水平也有改變，各階段DNMT1表達(dá)水平均較低于對(duì)照組，其中8月齡DNMT1有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；miR-185和miR-223表達(dá)水平均較高于對(duì)照組

5、，而miR-219表達(dá)水平則較低，其中4M時(shí)miR-219有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；部分指標(biāo)之間存在線性相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），其中NR2B與DNMT1、miR-185與miR-223為正相關(guān)，DNMT1與miR-185、NR2B與miR-185為負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：⑴生命早期鉛暴露能改變后期腦海馬回NMDAR亞基NR1、NR2A、NR2B mRNA的表達(dá)水平，提示生命早期鉛暴露可影響后期腦海馬回NMDAR的結(jié)構(gòu)和功能。⑵生