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文檔簡(jiǎn)介
1、基因組DNA文庫(kù)(genomicDNAlibrary)是含有某種生物體全部基因的隨機(jī)片段的重組DNA克隆群體。這個(gè)文庫(kù)中將含有基因組內(nèi)全部基因片段,它像一個(gè)貯存有基因組全部序列的信息庫(kù),故稱(chēng)為基因組文庫(kù)。 我們從特定大鼠的肝臟細(xì)胞中提取基因組DNA,選擇合適的限制性?xún)?nèi)切酶(Sau3AI)進(jìn)行部分酶切使之成為一定大小的片段,應(yīng)用蔗糖密度梯度離心法分離大小在9-23kb之間的片段。將此回收的大小合適的外源DNA片段與載體DNA(λ
2、噬菌體載體,λGEM-11)進(jìn)行連接,經(jīng)體外包裝,轉(zhuǎn)染細(xì)菌,得到一組含有不同DNA片段的重組噬菌體顆粒。通過(guò)倒平板測(cè)定包裝的噬菌體滴度,計(jì)算出噬菌斑形成率>106pfu/ug,說(shuō)明所建立的基因組文庫(kù)是完整的。挑取數(shù)個(gè)噬菌斑,提取重組λ噬菌體DNA,酶切檢查插入片段的大小,其插入片段在9-23kb之間。同時(shí)用高倍數(shù)感染法大規(guī)模制備λ噬菌體,提取基因組文庫(kù)DNA,通過(guò)PCR方法檢查基因組文庫(kù)的完整性,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳知PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)期
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