峨?yún)⑻崛∥锛捌鋯误w成分抗腫瘤活性及作用機(jī)理的研究.pdf

1、目的:探討峨?yún)⑻崛∥飳?duì)于HEPG2、MG-63、B16、HELA細(xì)胞體外的抗腫瘤活性和促凋亡的作用研究;探討峨?yún)?nèi)酯的急性毒性以及峨?yún)?nèi)酯對(duì)H22荷瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性及其分子機(jī)制。
　　 方法:應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)不同濃度峨?yún)⑻崛∥?0、2.5、5、10、20、40、80μg/ml)對(duì)HEPG2、MG-63、B16、HELA細(xì)胞增殖抑制作用，分別計(jì)算不同藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率與半數(shù)抑制濃度IC50;采用DAPI染色法、瓊

2、脂糖凝膠電泳法(DNAladder法)檢測(cè)峨?yún)?nèi)酯對(duì)HEPG2、MG-63、B16、HELA細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察;計(jì)算峨?yún)?nèi)酯對(duì)昆明小鼠的半數(shù)致死量LD50;采用腹水型肝癌細(xì)胞株建立小鼠移植腫瘤模型，待造模成功后隨機(jī)將小鼠分為7組，分別以峨?yún)?nèi)酯高劑量、中劑量、低劑量組、峨?yún)⒍嗵墙M以及替加氟組作為治療組，模型組及空白組給予0.5％CMC-Na作為對(duì)照。治療結(jié)束后，觀察小鼠的一般狀態(tài)，胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、藥物的抑瘤率及不同藥物組對(duì)小鼠的生命

3、延長(zhǎng)率，通過免疫組化技術(shù)初步檢測(cè)給予不同劑量的腫瘤組織中bax、bcl-2、P53的表達(dá)情況，探討峨?yún)⒖鼓[瘤的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果:1、峨?yún)⑹兔烟崛∥飳?duì)HEPG2、HELA細(xì)胞的抑制作用十分明顯，經(jīng)計(jì)算得出，峨?yún)⑹兔烟崛∥飳?duì)HEPG2、HELA細(xì)胞的IC50值分別為36.53μg/ml和18.25μg/ml，對(duì)于MG-63和B16細(xì)胞抑制作用較小;峨?yún)⒙确绿崛∥飳?duì)HEPG2、HELA兩種腫瘤細(xì)胞的IC50值分別為40.62

4、μg/ml和45.66μg/ml，對(duì)于MG-63和B16細(xì)胞抑制作用較小;峨?yún)⒁宜嵋阴ヌ崛∥锖投雲(yún)⒍嗵菐缀鯚o體外抗腫瘤活性;用峨?yún)?nèi)酯作用于四種腫瘤細(xì)胞48h后，對(duì)四種腫瘤細(xì)胞均具有顯著的抑制作用，經(jīng)計(jì)算得出，峨?yún)?nèi)酯對(duì)HEPG2、MG-63、B16、HELA四種腫瘤細(xì)胞的IC50值分別為12.24μg/ml、14.37μg/ml、43.25μg/ml和18.72μg/ml，且隨著藥物濃度的增長(zhǎng)，藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率增長(zhǎng)也十分顯著，在

5、藥物濃度為到80μg/ml時(shí)，抑制率均達(dá)到了70％以上;而異峨?yún)?nèi)酯僅對(duì)于B16細(xì)胞和MG-63細(xì)胞有較顯著的抑制作用，對(duì)于Hela細(xì)胞和HEPG2細(xì)胞幾乎無抗腫瘤作用，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件計(jì)算得出異峨?yún)?nèi)酯對(duì)MG-63細(xì)胞和B16細(xì)胞的IC50值分別為34.68μg/ml和65.72μg/ml;
　　 2、DAPI染色后，熒光顯微鏡觀察到，四種細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受到抑制，有明顯的細(xì)胞核斷裂和固縮，且隨著峨?yún)?nèi)酯濃度的增加，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象更加

6、明顯，而對(duì)照組（0μg/ml）細(xì)胞完整，未見任何細(xì)胞凋亡跡象;DNAladder檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中，用不同濃度峨?yún)?nèi)酯處理細(xì)胞后，藥物組均產(chǎn)生不同程度的細(xì)胞凋亡特征性DNA梯帶;
　　 3、通過對(duì)昆明小鼠給予峨?yún)?nèi)酯的急性毒性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)表明，峨?yún)?nèi)酯雖然具有較高的抗腫瘤活性，但是其急性毒性也較強(qiáng)，計(jì)算得出峨?yún)?nèi)酯的LD50為151.52mg/kg，其95％可信區(qū)間為93.28mg/kg-252.94mg/kg;
　　 4、

7、峨?yún)?nèi)酯高劑量、中劑量、低劑量組以及替加氟組對(duì)H22小鼠肝癌實(shí)體瘤的抑制率分別為54.39％、63.74％、56.14％、53.80％;通過免疫組化技術(shù)初步檢測(cè)給予不同藥物劑量的腫瘤組織中bax、bcl-2、P53的表達(dá)情況，初步研究表明，與模型組相比，峨?yún)?nèi)酯能顯著提高小鼠的生命延長(zhǎng)率，峨?yún)?nèi)酯能夠上調(diào)bax的表達(dá)，降低bcl-2/bax比值，從而起到誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞H22凋亡的作用，而各劑量組p53雖然均有一定的表達(dá)，但是各實(shí)驗(yàn)組之間無