亞硫酸鈉通過脂肪細胞對共培養(yǎng)肝細胞脂質(zhì)代謝的影響.pdf

1、目的：
　　探討亞硫酸鈉是否通過脂肪細胞來影響肝臟細胞內(nèi)甘油三酯（TG）與膽固醇含量，為研究亞硫酸鈉的肝毒性作用機制提供參考。
　　方法：
　　將3T3-L1前脂肪細胞進行誘導分化，成為成熟脂肪細胞，并用油紅O染色驗證；用不同濃度（0.02、0.1、0.5、2.5 mmol/L）Na2SO3和1 mmol/L油酸（OA）染毒脂肪細胞12 h，收集脂肪細胞上清，再分別用上述收集的各組脂肪細胞上清染毒HepG2細胞24 h

2、，即共培養(yǎng)組。另外再用同上述相同濃度（0.02、0.1、0.5、2.5 mmol/L）Na2SO3和1 mmol/L油酸單獨培養(yǎng)HepG2細胞24 h，即單獨培養(yǎng)組；采用游離脂肪酸（FFA）檢測試劑盒測定脂肪細胞上清中FFA含量；采用ELISA法測定脂肪細胞上清中脂聯(lián)素的含量；采用GPO-POD酶法測定脂肪細胞培養(yǎng)上清中的TG含量；采用有機抽提法提取肝細胞內(nèi)TG、總膽固醇（TC）和游離膽固醇（FC），再用POD酶法測定其含量；采用wes

3、tern blot法檢測Na2SO3對單獨培養(yǎng)組和共培養(yǎng)組肝細胞內(nèi)TG代謝相關蛋白腺苷酸活化蛋白激酶（AMPKα）、P-AMPKα、乙酰輔酶A羧化酶(ACC）、P-ACC、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FASN）、肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶1（CPT-1）和膽固醇代謝相關蛋白3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMGCR）、低密度脂蛋白受體（LDLR）、?；o酶A:膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（ACAT）的相對表達水平。<

4、br>　　結(jié)果：
　　1、與陰性對照相比Na2SO3各處理組脂肪細胞培養(yǎng)上清中FFA和脂聯(lián)素的含量都明顯減少（P＜0.05），TG含量無明顯變化（P＞0.05）。
　　2、Na2SO3處理后，單獨培養(yǎng)細胞內(nèi)TG含量無明顯變化（P＞0.05）。但是2.5 mmol/L亞硫酸鈉可引起共培養(yǎng)HepG2細胞內(nèi)TG的增加（P＜0.05）。
　　3、Western blot結(jié)果顯示，Na2SO3處理后，單獨培養(yǎng)肝細胞內(nèi)SREBP-

5、1c、AMPKα、P-ACC、CPT-1無明顯變化（P＞0.05）；2.5 mmol/L Na2SO3組和OA組FASN蛋白表達增高（P＜0.05）；ACC除0.5 mmol/L Na2SO3變化不明顯外，其余各組都升高（P＜0.05）。共培養(yǎng)組，P-ACC、SREBP-1c、FASN、CPT-1無明顯變化（P＞0.05）；未檢測到P-AMPKα；AMPKα和ACC的蛋白表達均增高（P＜0.05）。
　　4、Na2SO3處理后，單

6、獨培養(yǎng)肝細胞內(nèi)TC和FC含量的變化不明顯（P＞0.05）；0.5 mmol/L Na2SO3、2.5 mmol/L Na2SO3和1 mmol/L OA可引起共培養(yǎng)組肝臟細胞內(nèi)TC降低（P＜0.05）；而2.5 mmol/L Na2SO3和1 mmol/L OA可引起共培養(yǎng)組肝臟細胞內(nèi)FC含量增加（P＜0.05）。
　　5、Western blot結(jié)果顯示，Na2SO3處理后，單獨培養(yǎng)組肝細胞內(nèi)HMGCR表達無明顯變化（P＞0.0

7、5）；ACAT蛋白表達水平均增高（P＜0.05）；2.5 mmol/L Na2SO3使LDLR表達升高（P＜0.05）。共培養(yǎng)組，HMGCR和LDLR蛋白表達無明顯變化（P＞0.05）；ACAT蛋白表達增高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　暴露在較低劑量的Na2SO3環(huán)境下時，不會引起肝臟TG和膽固醇的增加。但暴露于2.5 mmol/L較高濃度的Na2SO3環(huán)境下，機體不能代謝解毒Na2SO3，則可能通過脂肪細胞的作用使肝