產(chǎn)殼聚糖酶菌株的發(fā)酵條件優(yōu)化、殼聚糖酶的分離純化與酶學性質(zhì)研究.pdf

1、_ 9 8 9 5 】7分類號 密級U 1 ) c —————————————————————————————————————————————一 ⑧研究生學位論文產(chǎn)殼聚糖酶菌株的發(fā)酵條件優(yōu)化、殼聚糖酶的分離純化與酶學性質(zhì)研究研究生姓名 段 妊指導教師姓名韓窒左教授申請學位級荊 亟± 專業(yè)領域漁瀅生物堂論文答辯日期全鯉§生壘旦墨! 旦學位授予日期2 兇壁生曼縣一中國海洋大學蘭塞塞堡墮墮鱉竺壟壁墨竺垡些：塞塞塑墮塑坌墨絲

2、! 蘭皇墮蘭竺墾墮窒S t u d y o no p t i m a l f e r m e n t a t i o n c o n d i t i o n s o f a c h i t o s a n a s e -p r o d u c i n g b a c t e r i u m ，p u r i f i c a t i o n a n d c h a r a c e r i z a t i o n o ft h e c h

3、i t o s a n a s eA b s t r a c tC h i t o s a n a s ew h i c hc a t a l y z et h eh y d r o l y s i so f g l y c o s i d i cb o n d so f c h i t o s a n ，c o u l dh y d r o l y z ec h i t o s a ni n t of u n c t i o n a

4、lc h i t o o l i g o s a c c h a r i d e sa n d g l u s o s a m i n e ．O u r r e s e a r c hf o c u s e so nf i n d i n gn e ws o u r c eo fc h i t o s a n a s e f r o mm i c r o o r g a n i s m s ，a n d p r o v i d i n

5、gt e c h n i c a ls u p p o r t o n e n z y m i c p r e p a r a t i o n o f c h i t o o l i g o s a c c h a r i d e s ．A s t r a i n w i t hc h i t o s a n a s e a c t i v i t yw a si s o l a t e d f r o ms o i l s a m p

6、 l e s ．T h eo p t i m a lc o m p o s i t i o n so f t h em e d i u mf o rP 0 0 3s t r a i n p r o d u c i n g c h i t o s a n a s e a r ea sf o l l o w s ( ％，w ／v ) ：p o w d e r c h i t o s a n1 ．0 ，g l u c o s e 0 ．1 ，

7、( N I - ] 4 ) 2 S 0 42 ．0 ，y e a s te x t r a c t0 ．3 ，K 2 H P 0 4 0 ．0 7 ，K H 2 P 0 4 0 ．0 3 ，N a C l0 ．5 ，M g S 0 4 ·7 H 2 00 ．0 5 ，t h e i n i t i a lp H 5 ．0 ．T h eo p t i m a l c u l t i v a t i o nc o n d i t

8、i o n sf o r P 0 0 3p r o d u c i n g c h i t o s a n a s e a r e5 0 0 m L f l a s kc o n t a i n i n g1 5 0 m L m e d i u m ，2 ．O ％( v ／v ) a m o u n to f i n o c u l a t i o n ，3 2 “ Ci n c u b a t i n g t e m p e r a

9、t u r ea n d s h a k i n g c u l t i v a t i o na t 15 0 r p m f o r 9 6 h o u r s ．T h e c h i t o s a n a s e a c t i v i t y o ff e r m e n t e d b r o t h C a nr e a c h1 0 8 u m o l ／m L ·m i n w h e n P 0 0 3

10、i si n c u b a t e d u n d e r a f o r e m e n t i o n e d c o n d i d o n s ．T h e c h i t o s a n a s e o f t h e f e r m e n t e d b r o t h i s e x t r a c t e d b y a m m o n i u m s u l f a t ep r e c i p i t a t i

11、 o n ( 7 0 ％s a t u r a t i o n ) ．a(chǎn) n dp u r i f i e d b yQ - S e p h a r o s eF a s tF l o wc o l u ma n dS e p h a d e xG ．7 5 c o l u m ，S D S —P A G Es h o w s a s i l l 舀eb a n d f o rm e p u r i f i e dc h i t o s

12、 a n a s ea n dt h em o l e c u l a rw e i g h t i se s t i m a t e d t ob e 3 0 ．5 k D ．T h eo p t i m a lt e m p e r a t u r ef o r a c t i v i t yf o rh y d r o l y s i s o ft h ec h i t o s a n a s e i s 4 5 “ C a n

13、dt h eo p t i m a l p Hi s 5 ．8 ，r e s p e c t i v e l y ；T h ec h i t o s a n a s ea c t i v i t y i ss t a b l e i n t h e p H r a n g e o f 5 ．0 —1 1 ．0 a n d t h e t e m p e r a t u r e u n d e r 4 5 。C ；M n 2 + c a

14、I le n h a n c e t h ee n z y m e a c t i v i t ys i g n i f i c a n t l y , w h e r e a sH 9 2 + ，c d 2 + ，F(xiàn) e 3 + ，C u Z + a n dA 礦C a n i n h i b i t t h ee n z y m ea c t i v i t y ；E D T A ，G l u N H 2 ‘H C Ia n dS

15、D S i n h i b i tt h ee n z y m ea c t i v i t ya l s o ，w h e r e a s1 3 - m e r c a p t o e t h a n o lh a sn oe f f e c to n i t ；t h ee n z y m es h o w a c t i v i t yf o r c o l l o i d a lc h i t o s a n ，c h i t