黃芩苷治療妊娠期高血壓疾病的研究.pdf

1、第一部分中醫(yī)藥治療妊娠高血壓綜合征的文獻(xiàn)研究
　　目的和方法：妊娠期高血壓綜合征屬“子癇”、“子暈”、“子腫”的范疇。通過總結(jié)近26年來以中醫(yī)藥治療妊娠高血壓綜合征相關(guān)疾病的文獻(xiàn)報(bào)告，對(duì)妊娠高血壓綜合征常見的中醫(yī)辨證進(jìn)行簡(jiǎn)單的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及常用的中藥進(jìn)行頻數(shù)、頻率統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果及結(jié)論：通過簡(jiǎn)單的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得出本病中常見的中醫(yī)證型中前9位依次為：脾虛水泛證、肝火熾盛證、肝陽上亢證、脾虛肝旺證、濕熱瘀結(jié)證、脾腎陽虛證、痰濁

2、上擾證、肝腎陰虛證以及氣血兩虧證。常用中藥前20位依次為：茯苓皮、白術(shù)、當(dāng)歸、黃芪、砂仁、澤瀉、車前子、山藥、陳皮、龍骨、牡蠣、桑寄生、枸杞、白芍、天麻、鉤藤、黃芩、菊花、山萸肉、杜仲。通過對(duì)妊娠期高血壓綜合征總體的中醫(yī)辨證分型及總體中藥的研究，便于對(duì)妊娠期高血壓綜合征進(jìn)行證型的統(tǒng)一和選取最佳治療效果的中藥，總結(jié)病因病機(jī)和用藥規(guī)律，便于證型的標(biāo)準(zhǔn)化和選方用藥的統(tǒng)一化。
　　第二部分黃芩苷對(duì)子癇前期臍靜脈細(xì)胞MAPK信號(hào)通路的影響<

3、br>　　目的：近年來研究發(fā)現(xiàn)，MAPK是介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)和炎性因子表達(dá)的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與介導(dǎo)了子癇前期發(fā)病機(jī)理中血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。通過對(duì)中醫(yī)藥治療妊娠期高血壓疾病的治療規(guī)律文獻(xiàn)研究中我們發(fā)現(xiàn)黃芩是一個(gè)用藥頻率比較高的藥物，說明了黃芩廣泛應(yīng)用于妊娠期高血壓疾病的應(yīng)用。在探討子癇前期內(nèi)皮細(xì)胞的損傷的過程中，我們發(fā)現(xiàn)中藥黃芩的有效提取成份可能對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷具有保護(hù)作用。中藥黃芩為唇形科植物，現(xiàn)代藥理研究

4、表明黃芩具有抗菌、抗感染、抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)靜及心血管和保護(hù)內(nèi)皮損傷的等多種藥理作用。黃芩苷為黃芩的主要有效成分之一。研究發(fā)現(xiàn)[1]，黃芩苷的抗炎作用主要是通過抑制 MAPK信號(hào)通路的磷酸化水平及提高抗炎因子的表達(dá)水平來發(fā)揮其抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)通過培養(yǎng)HUVEC,通過構(gòu)建人的內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，研究中藥單體黃芩苷對(duì)MAPK信號(hào)通路的影響。探討黃芩苷對(duì)子癇前期疾病的防治可能具有的作用機(jī)制，為黃芩苷在以后的臨床作用中廣泛應(yīng)用提供理論依據(jù)。

5、　　方法：先培養(yǎng)人的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，然后分組。第一大組：①在高糖的DMEM培養(yǎng)基的環(huán)境下，以子癇前期孕婦血清構(gòu)建內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，于血清干預(yù)48h后收集臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，Western Blot與RT-PCR法分別檢測(cè)子癇前期輕度組、重度組及正常妊娠組MAPK信號(hào)通路（p38、JNK通路等）及ICAM-1的蛋白的表達(dá)及mRNA轉(zhuǎn)錄情況；第二大組：特異性抑制劑組：在高糖環(huán)境下，以子癇前期孕婦血清構(gòu)建內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，并在干預(yù)48小時(shí)后，加入

6、p38MAPK通路特異性抑制劑SB203580、JNK通路特異性抑制劑 AEG3482，然后分別在低糖的 DMEM環(huán)境下干預(yù)子癇前期輕度及子癇前期重度組24小時(shí),觀察P38、JNK通路的激活是否影響ICAM-1的表達(dá)。第三大組：高糖環(huán)境下，以子癇前期血清干預(yù)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞48h小時(shí)后，再加入黃芩苷60ug/ml在低糖環(huán)境下干預(yù)24h，檢測(cè)黃芩苷干預(yù)后 MAPK信號(hào)通路(p38、JNK通路)及ICAM-1蛋白及mRNA表達(dá)，觀察黃芩苷加入

7、細(xì)胞后是否有效阻斷了MAPK信號(hào)通路中兩個(gè)亞家族(p38、JNK通路)的激活（磷酸化）及影響ICAM-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.與正常妊娠組相比較，子癇前期輕度妊娠組及子癇前期重度妊娠組 p-P38MAPK、p-JNK及 ICAM-1三者的蛋白表達(dá)的相對(duì)表達(dá)水平及P38MAPK、JNK及ICAM-1mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著升高，兩者相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)子癇前期重度組這三項(xiàng)指標(biāo)的蛋白及mRNA的相對(duì)表達(dá)量均高于子癇前

8、期輕度組，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.特異性抑制劑組與單純血清干預(yù)組比較：p38抑制劑組：輕度及重度子癇前期組p-p38和ICAM-1的蛋白質(zhì)的相對(duì)表達(dá)量及mRNA的相對(duì)表達(dá)量較輕度以及子癇前期重度組均有降低；JNK抑制劑組：輕度及重度子癇前期組經(jīng)JNK抑制劑AEG3482干預(yù)后的ICAM-1、p-JNK的蛋白及mRNA的表達(dá)量較輕度及重度子癇前期血清組均有降低。
　　3．黃芩苷干預(yù)組：加入黃芩苷后的輕度及重度子癇前期組

9、p38MAPK、JNK/SAPK磷酸化的蛋白及ICAM-1的相對(duì)表達(dá)水平及mRNA的相對(duì)表達(dá)量均有明顯下降，而正常妊娠組在黃芩苷干預(yù)24小時(shí)后與未用黃芩苷組相比p-p38、p-JNK及ICAM-1蛋白的相對(duì)表達(dá)量及mRNA的相對(duì)表達(dá)量無明顯變化。
　　結(jié)論：子癇前期孕婦血清可以刺激人的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中 p38MAPK，JNK通路的活化及內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)量增加，這種激活作用與子癇前期疾病的病情輕度有關(guān)，p38及JNK的表達(dá)