條斑紫菜多糖分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、條斑紫菜(Porphyrayezoensis))具有較高的食用和藥用價(jià)值，大量研究已表明紫菜多糖具有降血脂、抗凝血、抗腫瘤、抗輻射、抗疲勞、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等多種生物學(xué)活性。本研究主要應(yīng)用超濾膜技術(shù)，采用4種不同截留分子量(MWCO)的超濾膜對(duì)條斑紫菜多糖（Porphyrayezoensis Polysaccharide，PP）進(jìn)行分離純化，得到分子量為PPⅠ（MW≥100,000）、PPⅡ（MW：50,000-100,000）、PP

2、Ⅲ（MW：10,000-50,000）、PPⅣ（MW：5,000-10,000）和PPⅤ（MW≤5,000）的多糖，對(duì)5種不同分子量的多糖進(jìn)行體外抗氧化活性研究。進(jìn)一步對(duì)體外抗氧化活性較高的多糖組分PPⅣ和PPⅤ進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定及體內(nèi)抗氧化活性研究，以期探討紫菜多糖結(jié)構(gòu)與其生物活性之間的構(gòu)效關(guān)系，為條斑紫菜多糖活性成分開發(fā)利用提供一種新方法。
　　本文以條斑紫菜為原料，微波輔助萃取技術(shù)提取多糖，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)方法

3、研究多糖提取的最優(yōu)工藝條件。選取液料比、pH、微波輔助處理時(shí)間、水浴溫度進(jìn)行優(yōu)化分析，以確定條斑紫菜多糖的最佳提取條件。響應(yīng)面研究結(jié)果表明微波輔助提取條斑紫菜多糖的較優(yōu)工藝條件為：液料比60mL/g，水提液pH8.0，微波輔助處理時(shí)間9min，水浴溫度100℃。在此條件下條斑紫菜多糖的提取率為12.73％±0.09%(n=5)，與模型預(yù)測(cè)值非常接近。
　　對(duì)不同分子量的條斑紫菜多糖進(jìn)行體外抗氧化活性研究。結(jié)果表明，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)

4、，不同分子量的多糖在不同的濃度下都具有較強(qiáng)的抗氧化能力，對(duì)羥自由基（·OH）、超氧陰離子（·O2-）、DPPH·自由基都具有較好的清除能力，自由基清除率與多糖濃度呈現(xiàn)量效關(guān)系，均隨濃度的增加而增大；抗氧化能力與其相對(duì)分子質(zhì)量大小相關(guān)，分子量較小的PPⅣ和PPⅤ抗氧化能力較強(qiáng)，明顯高于分子量較大的PPⅠ。超濾能夠?qū)崿F(xiàn)不同分子量PP的良好分離，可作為條斑紫菜多糖活性成分開發(fā)利用的一種新方法。
　　SOD、GSH-Px、CAT是機(jī)體內(nèi)廣

5、泛存在的幾種重要的抗氧化酶，他們能有效清除氧自由基，保護(hù)生物體細(xì)胞避免氧化損傷。MDA是生物膜脂質(zhì)過(guò)氧化的降解產(chǎn)物，是反映過(guò)氧化損傷的常用指標(biāo)，MDA含量增高會(huì)引起細(xì)胞損傷?？寡趸瘎┛梢蕴岣唧w內(nèi)抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)的活性，清除體內(nèi)自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化物，從而有效地防止或減輕體內(nèi)自由基所導(dǎo)致的氧化損傷，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，延緩衰老。
　　不同分子量條斑紫菜多糖體內(nèi)抗氧化活性分析：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，衰老模型組小鼠在連續(xù)注射

6、D-半乳糖60d后，肝臟組織、腦組織和血液中SOD、GSH-Px、CAT活性均顯著下降，MDA含量顯著升高,說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中的衰老模型建立成功。PPⅣ和PPⅤ的中劑量組和高劑量均組能不同程度顯著提高肝臟組織、腦組織和血液中SOD活力、GSH-Px活力和CAT活力，顯著降低MDA含量，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化作用，表明條斑紫菜多糖具有較好的抗氧化作用，值得進(jìn)一步研究與開發(fā)。
　　柱層析法分離純化條斑紫菜多糖。采用超濾膜法分離出的PPⅣ和PPⅤ

7、多糖提取液，除蛋白后，減壓濃縮，95%乙醇沉淀，冷凍干燥得到PPⅣ和PPⅤ粗多糖。粗多糖經(jīng)DEAE-52陰離子交換層析柱獲得四種帶有不同電荷性質(zhì)的多糖PPⅣ-D1、PPⅣ-D2、PPⅤ-D1和PPⅤ-D2，葡聚糖凝膠G-100層析柱對(duì)這四種多糖進(jìn)一步純化，各組分洗脫峰峰型狹窄對(duì)稱，分離效果較好，最后冷凍干燥獲得四個(gè)條斑紫菜多糖純品PPⅣ-G1、 PPⅣ-G2、PPⅤ-G1和PPⅤ-G2。
　　采用紅外光譜測(cè)定儀，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀

8、，核磁共振光譜分析儀對(duì)多糖純品PPⅣ-G1、 PPⅣ-G2、PPⅤ-G1和PPⅤ-G2進(jìn)行進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。紅外光譜分析表明四種純品均具有多糖的特征吸收峰；PPⅣ和PPⅤ組分中均主要由3,6-內(nèi)醚半乳糖組成，含有硫酸基，不含糖醛酸；四個(gè)多糖純品中可能含有葡萄吡喃糖殘基。將多糖 PPⅣG-1、PPⅣG-2、PPⅤG-1、PPⅤG-2還原水解為單糖，乙?；筮M(jìn)行GC分析，根據(jù)各單糖色譜峰與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間對(duì)照，PPⅣG-1、PPⅣG-2和PPⅤ