持久性有機(jī)污染物發(fā)光及免疫分析法研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)技術(shù)的飛速發(fā)展，釋放到自然環(huán)境中的危害環(huán)境和人類健康的化學(xué)品越來(lái)越多，人們對(duì)這些化學(xué)品的警惕性也在不斷提高。一類被稱為持久性有機(jī)污染物(POPs)的物質(zhì)已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)問題，因?yàn)檫@類物質(zhì)具有持久性、易于生物富集，同時(shí)它們對(duì)人和生物具有免疫毒性、內(nèi)分泌毒性、“三致”以及其它一些毒性效應(yīng)，給人們帶來(lái)越來(lái)越多的健康和環(huán)境問題。
　　 目前對(duì)POPs的分析最常用的是色譜、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)，這是因?yàn)樵摷夹g(shù)可以分析復(fù)雜

2、物質(zhì)，并且能夠獲得可靠的結(jié)果;但是這些儀器分析法需要貴重的儀器，繁重的樣品前處理(純化、濃縮或者衍生化)，大量的有害有機(jī)溶劑以及大量的輔助試劑，不利于大量樣品的實(shí)時(shí)分析測(cè)定。因此，發(fā)展能夠?qū)OPs進(jìn)行快速篩查的生物分析方法具有重要意義。
　　 熒光分析及電化學(xué)發(fā)光分析法都具有很高的靈敏度，被認(rèn)為是極具應(yīng)用潛力的新型分析技術(shù)。熒光分析法由于其靈敏度高使其成為目前公認(rèn)的最靈敏的檢測(cè)方法之一，同時(shí)它還具有選擇性強(qiáng)，使用簡(jiǎn)便等優(yōu)良特點(diǎn)

3、，使得熒光分析法在環(huán)境監(jiān)測(cè)及生命科學(xué)等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用。免疫分析法具備有效的靈敏度、特異性、快速和低成本的優(yōu)點(diǎn);可對(duì)大量的樣品進(jìn)行常規(guī)分析;能夠用于樣品的定性篩選，也能夠?qū)悠愤M(jìn)行定量測(cè)定以確定樣品中待測(cè)組分的含量;免疫檢測(cè)手段在臨床、生物制藥和環(huán)境化學(xué)等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。電化學(xué)發(fā)光分析法不僅具有化學(xué)發(fā)光分析法的線性范圍寬、靈敏度高及儀器簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，而且具有電化學(xué)分析過程可控性好、選擇性強(qiáng)、發(fā)光信號(hào)易于檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。基于以上現(xiàn)狀，

4、本文主要做了以下三方面的研究工作:
　　 (1)間接熒光法檢測(cè)五氯苯酚(PCP):五氯酚本身不具有熒光性質(zhì)，建立五氯酚的熒光分析技術(shù)具有很大挑戰(zhàn)。Ce3+能發(fā)射強(qiáng)的熒光而Ce4+沒有熒光，PCP能夠消耗羥基自由基;試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)辣根過氧化氫酶(HRP)可以催化氧化過氧化氫(H2O2)產(chǎn)生羥基自由基，同時(shí)羥基自由基可以將Ce3+氧化為Ce4+，使得熒光淬滅;當(dāng)存在目標(biāo)物PCP時(shí)，Ce3+和PCP競(jìng)爭(zhēng)消耗羥基自由基使得熒光淬滅受到抑制?；?/p>

5、于這個(gè)現(xiàn)象建立了PCP的間接熒光檢測(cè)法。該方法不需要復(fù)雜的熒光標(biāo)記反應(yīng)，其線性范圍為1.0×10-8～1.0×10-4M，檢測(cè)限為5.0×10-9M。
　　 (2)熒光偏振免疫分析(FPIA)檢測(cè)八氯苯乙烯(OCS):通過實(shí)驗(yàn)室自制抗體，利用以羅丹明B標(biāo)記的八氯苯乙烯半抗原為熒光標(biāo)記物(Rhodamine B-hapten)，依據(jù)熒光標(biāo)記半抗原與其抗體反應(yīng)前后熒光偏振程度的不同，用競(jìng)爭(zhēng)性方法檢測(cè)溶液中抗原(OCS)的含量。在最優(yōu)

6、條件下對(duì)OCS進(jìn)行分析檢測(cè)，其線性范圍為0.65～650 nM，檢測(cè)下限為0.34 nM。該方法比高效液相色譜和氣相色譜更加簡(jiǎn)單快速，同時(shí)回收率(＞90％)。試驗(yàn)表明，該熒光偏振免疫分析法可用用于環(huán)境、生物以及農(nóng)業(yè)樣品的現(xiàn)場(chǎng)分析檢測(cè)。
　　 (3)電化學(xué)發(fā)光均相免疫分析檢測(cè)三(2，3-二溴丙基)異氰脲酸酯(TBC):利用恒電壓陽(yáng)極氧化法制備孔徑均一的二氧化鈦納米管陣列(TiO2 NTs)作為工作電極，以魯米諾標(biāo)記的半抗原分子為發(fā)

7、光物質(zhì)(luminol-hapten)，實(shí)驗(yàn)室通過免疫新西蘭雄性小白兔自制多克隆抗體;luminol-hapten能發(fā)射較強(qiáng)的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)，當(dāng)溶液中存在抗TBC抗體時(shí)，通過發(fā)生特異免疫反應(yīng)形成大分子，由于空間位阻效應(yīng)抑制了電化學(xué)反應(yīng)，使得電化學(xué)發(fā)光(ECL)信號(hào)淬滅，當(dāng)溶液中存在目標(biāo)物TBC時(shí)由于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體使得ECL淬滅受到抑制，基于這個(gè)原理用于檢測(cè)TBC。實(shí)驗(yàn)表明，TBC濃度的對(duì)數(shù)與ECL抑制效率存在線性關(guān)系，線性范圍為0.42～