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1、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文大豆、玉米轉(zhuǎn)基因成分的競(jìng)爭(zhēng)定量PCR檢測(cè)姓名:欒春光申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):食品科學(xué)指導(dǎo)教師:羅云波20030601AbstractGeneticallymodifiedsoybeanandmaizewerequalitativelyandquantitativelydetectedusingPCR,thispaperfurtherprovidedrelevanttheoreticalbasisandexperi
2、mentalmethodfortransgenicfoodanalysis35SpromoterandNOSterminaterwasstudiedastheobjectAsthefirststep,transgeniccontentswerequalitativelydetectedbyPCRandsouthemblotsThen,theywerequantitativelydetectedbyheterologousandhomol
3、ogouscompetitivetemplates,ThekeyproblemofQcPCRisthatcompetitoristheconstructionofthecompetitorTheheterologouscompetitorisconstructedasfollows:theEcoligenomicDNAwaslowstringentlyamplified,andthentheselectivebandwaspurifie
4、dandligatedTeasyvectorThehomologouscompetitorisconstructedasfollows:theplasmidPBll21wasamplifiedby35SandNOSspecificprimerandthentheselectivefragmentwaspurifiedandsubclonedtoTeasyvectortogeneraterecombinantplasmid,whichis
5、digestedbyrestrictionenzyme,the40bpfragmentwithclosmidendwasinsertedThecompetitorconcentrationsweieadjustedsothattheintensityoftheamplicationproductofDNAcontainingaproportionof1%GMOwasequaltotheintensityoftheamplicationp
6、roductoftheco—amplifiedhomologouscompetitorDNAand2%GMOcontentswasequaltotheintensityoftheamplieationproductofthecoamplifiedheterologouscompetitorDNAThetemplateDNA(500ng)mixturescontainingdifferentproportionsofGMOwereampl
7、ifiedwithconstantamountsofcompetitorDNAinordertodeterminescopeoftransgeniccontentsinfoodsamples,Theresultsindicatedthattheoptionalanneallingtemperatureof35SpromoterandNOSterminateris58“Cand52℃respectivelythereliabilityof
8、PCRmethodwasfurtherprovedbysouthernblots;heterologousandhomologouscompetitivesystemspresentedallowedthedetectionof2%and1%modifiedcontentsintotalDNA,respectivelyToanalyticalsamples,theuniformresultswereobtainedbybothsyste
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