納米纖維在獸藥殘留檢測方面的應(yīng)用.pdf

1、動物源性食品中的獸藥殘留對人們的身體健康造成了巨大的威脅，準(zhǔn)確，快速的檢測方法是保障食品安全的強(qiáng)大技術(shù)支撐。隨著科技的日益發(fā)展，檢測技術(shù)也越來越先進(jìn)，但是樣品前處理要求仍然是重要和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
　　本研究擬在以下三個方面進(jìn)行研究:1）優(yōu)化聚苯乙烯(PS)納米纖維提取氯霉素的條件，建立牛奶中氯霉素檢測的快速前處理和HPLC檢測方法;2）嘗試用聚冠醚—聚苯乙烯(PCE-PS)納米纖維固相萃取6種β-受體激動劑，優(yōu)化基于PCE-PS納米纖

2、維固相萃取的前處理方法，建立豬肉中6種β-受體激動劑的納米纖維固相萃取-UPLC-MS/MS檢測方法;3）首次使用PEDOT納米簇固相提取磺胺類藥物，優(yōu)化了提取條件，建立了基于PEDOT納米簇固相提取的蜂蜜中20種磺胺類藥物的UPLC-MS/MS檢測方法。主要研究工作簡述如下:
　　一、基于PS納米纖維的牛奶中氯霉素檢測的快速前處理和HPLC檢測方法建立
　　由于含有大量脂類和蛋白質(zhì)，牛奶中氯霉素檢測的樣品前處理方法操作繁瑣

3、，耗時長、效率低，本實(shí)驗(yàn)首次將納米纖維應(yīng)用于氯霉素檢測的前處理，建立了牛奶中氯霉素檢測的快速前處理方法。在樣液中加入高氯酸沉淀蛋白，離心后取上清液調(diào)節(jié)pH至中性后直接過柱，100μL甲醇洗脫得洗脫液，取20μL注入高效液相色譜儀檢測。流動相為甲醇:Na2HPO4-檸檬酸緩沖液（1:2，V/V，pH=3.8），流速1.0mL/min，紫外檢測波長277nm。
　　實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了高氯酸濃度、溶液的pH、鹽濃度、洗脫劑用量。在最優(yōu)條件下，方

4、法的定量線性范圍為0.05-10μg/mL。方法的回收率為92.3％-105.3％，日內(nèi)RSD為2.5％-8.9％，日間RSD為11.7％。與C18固相萃取法相比，本方法操作簡便，效率高，且精密度高，回收率好，是一種可靠并且相對高效環(huán)保的方法，可應(yīng)用于牛奶中氯霉素的檢測。
　　二、基于PCE-PS納米纖維固相萃取的豬肉中6種β-受體激動劑UPLC-MS/MS檢測方法建立
　　PS納米纖維固相萃取柱的應(yīng)用解決了許多非極性物質(zhì)的

5、前處理問題，但是對于極性物質(zhì)的直接提取表現(xiàn)不佳。本實(shí)驗(yàn)紡制了PCE-PS混紡納米纖維，通過增加材料中的極性吸附位點(diǎn)，改善納米纖維對中等極性和極性較大目標(biāo)物的提取效果。
　　本實(shí)驗(yàn)將PCE-PS混紡納米纖維應(yīng)用于6種PEAs殘留檢測的樣品前處理，建立了豬肉中PEAs殘留的納米纖維固相萃取-UPLC-MS/MS檢測方法。豬肉樣品的勻漿經(jīng)高氯酸溶液沉淀蛋白后，離心取全部上清調(diào)節(jié)pH=10后過已活化的PCE-PS小柱，200μL甲醇溶液洗

6、脫至進(jìn)樣瓶中，補(bǔ)加300μL0.1％甲酸水溶液，混勻后進(jìn)樣。進(jìn)UPLC-MS/MS檢測。色譜條件為色譜柱:WatersBEHC18，1.7μm，2.1×100mm;流動相A:0.1％甲酸水溶液，流動相B:0.1％甲酸乙腈溶液;梯度洗脫:0-3min:10％B～35％B，3-5min:35％B～80％B,5-6.5min:80％B～80％B,6.5-6.7minS0％B～10％B,6.7-9.5min:10％B～10％B;流速:0.2mL

7、/min;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:10μL。質(zhì)譜條件為噴霧離子化，正離子掃描，噴霧電壓:3500V，離子傳輸管溫度:350℃，鞘氣流速:15L/min，輔助器流速:5L/min，碰撞氣:氬氣(1.5torr)。
　　實(shí)驗(yàn)考察了不同納米材料的提取效率，優(yōu)化了提取的介質(zhì)pH和洗脫液的體積。在優(yōu)化條件下，PEAs分離良好?？瞻棕i肉中不含有干擾測定的物質(zhì)，方法在1.0μg/kg-25.0μg/kg范圍內(nèi)線性良好。各加標(biāo)濃度的回收率范圍為79

8、.7％-110.1％。日內(nèi)測定的RSDintra(n=5)在1.5％-10.5％之間，日間測定的RSDinter(n=5)為4.7％-11.8％。
　　三、基于PEDOT納米簇固相提取的蜂蜜中20種磺胺類藥物的UPLC-MS/MS檢測方法建立
　　由于SAs的極性較強(qiáng)，一般的前處理方法都比較復(fù)雜。本文首次嘗試使用導(dǎo)電高聚物-PEDOT納米簇作為固相萃取材料。該材料的結(jié)構(gòu)和所帶的電荷特性為提取磺胺這類極性物質(zhì)提供了可能。本文自

9、制了PEDOT固相萃取柱，建立基于PEDOT納米簇固相萃取的蜂蜜中20中SAs的UPLC-MS/MS檢測方法。
　　蜂蜜經(jīng)純水溶解后直接過已活化的PEDOT固相萃取柱，1mL蒸餾水淋洗，200μL10％甲酸甲醇溶液洗脫，補(bǔ)加300μL純水，混勻后進(jìn)UPLC-MS/MS檢測。超高效液相色譜條件為色譜柱:WatersBEHC18，1.7μm，2.1×100mm;流動相A:0.1％甲酸水溶液，流動相B:0.1％甲酸甲醇溶液;梯度洗脫:0

10、-10min:10％B～60％B，10-10.2min:60％B～10％B，10.2-14min:10％B～10％B;流速:0.2mL/min;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:10μL。質(zhì)譜條件與β-受體激動劑的檢測方法相同。
　　本實(shí)驗(yàn)比較了不同納米材料對20種SAs的吸附效率，最終選擇PEDOT納米簇作為吸附劑;考察了PEDOT納米簇對SAs的吸附容量;考察了介質(zhì)pH值對吸附的影響，結(jié)果表明介質(zhì)pH=4時，PEDOT納米簇的磺胺類藥物的

11、吸附效果最佳;考察不同種類洗脫液對SAs的洗脫情況，最終確定以200μL10％(V/V)的甲酸甲醇溶液為洗脫液，純水為淋洗液。
　　在優(yōu)化條件下，20種SAs分離良好，空白蜂蜜中不含有干擾測定的物質(zhì)。20種SAs在10.0μg/kg-250.0μg/kg范圍內(nèi)線性良好，各個加標(biāo)濃度的回收率范圍均在89.3％-109.4％。日內(nèi)測定的RSDintra(n=5)在2.0％-12.4％之間，日間測定的RSDinter(n=5)為在4.2