肢體缺血后處理對(duì)糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的： 高血糖影響卒中死亡率和神經(jīng)功能恢復(fù)。本研究建立糖尿病大鼠合并急性腦缺血再灌注動(dòng)物模型；探討肢體缺血后處理（I-PostC）誘導(dǎo)的遠(yuǎn)隔器官缺血后處理（RPostC）對(duì)糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷神經(jīng)功能障礙、腦梗死體積及細(xì)胞凋亡、線粒體超微結(jié)構(gòu)和功能的影響；探討RPostC對(duì)糖尿病合并急性腦缺血的保護(hù)機(jī)制。 方法： （1）采用空腹腹腔內(nèi)注射鏈脲霉素（streptozotocin，STZ）建立實(shí)驗(yàn)性糖尿病大

2、鼠模型，在此基礎(chǔ)上采用線栓法閉塞大腦中動(dòng)脈（MCAO）建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。造模成功的60只雄性SD大鼠分為4組：空白對(duì)照組；假手術(shù)組；缺血再灌注組（I/R組）；肢體缺血后處理（RPostC組）。 （2）肢體缺血后處理方法：缺血90 min再灌注6h，同時(shí)捆綁雙下肢5 min，以不能觸及股動(dòng)脈搏動(dòng)為準(zhǔn)，松開5 min，反復(fù)3次，恢復(fù)灌注。 （3）再灌注6h后采用Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分（ne

3、urologic deficit scores，NDS）。斷頭取腦采用TTC染色法測(cè)定腦梗死體積；HE染色光鏡下觀察缺血腦組織病理變化；TUNEL標(biāo)記觀察神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化；透射電鏡下觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)；試劑盒測(cè)定線粒體丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、Na+，K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和GSH-Px含量。 （4）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，組間比較采用單因素方差分析（

4、ANOVA），方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，進(jìn)一步用SNK-q檢驗(yàn)及Dunnett-t檢驗(yàn)作兩兩比較。神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分以中位數(shù)表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： （1）一般觀察及神經(jīng)功能障礙評(píng)分比較糖尿病大鼠血糖明顯增高，達(dá)到糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，且有多飲、多食、多尿及消瘦等表現(xiàn)。與空白對(duì)照組和假手術(shù)組相比，I/R組和RPostC組均表現(xiàn)為不同程度的神經(jīng)功能缺損，NDS明顯升高。與I/R組比較，RP

5、ostC組NDS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 （2）各組大鼠腦梗死體積比較（TTC染色）梗死區(qū)呈蒼白色且與大腦中動(dòng)脈供血分布區(qū)一致。與空白對(duì)照組和假手術(shù)組相比，I/R組和RPostC組腦梗死體積百分比明顯升高（P<0.01）。與I/R組比較，RPostC組梗死體積百分比降低（P<0.05）。 （3）各組大鼠光鏡觀察結(jié)果對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠大部分細(xì)胞邊界清楚，核形狀規(guī)則，少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)核染色變深，胞漿部分消失等變性的表現(xiàn)。

6、I/R組神經(jīng)元大量丟失，大部分細(xì)胞出現(xiàn)胞漿固縮，核固縮、碎裂。RPostC組上述病理改變明顯好轉(zhuǎn)，少數(shù)神經(jīng)元出現(xiàn)缺血、脫失及胞漿固縮。 （4）各組大鼠凋亡細(xì)胞比較（TUNEL法）凋亡細(xì)胞的細(xì)胞體積明顯縮小，細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)濃縮、邊聚?？瞻讓?duì)照組及假手術(shù)組可見稀少散在分布凋亡神經(jīng)元，I/R組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加。與I/R組相比，RPostC組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少（P<0.01）。 （5）各組大鼠線粒體超微結(jié)構(gòu)比較空白對(duì)照組和假手

7、術(shù)組可見基本正常的線粒體，間隙腫脹，但膜的結(jié)構(gòu)尚完整。I/R組多數(shù)線粒體基質(zhì)消失，結(jié)構(gòu)破壞，重者線粒體明顯空泡化，伴內(nèi)外膜的崩解。RPostC組少數(shù)線粒體有空泡，結(jié)構(gòu)較完整線粒體損傷較I/R組明顯減輕。 （6）各組大鼠線粒體MDA、SOD、ATP酶、GSH-PX比較I/R組和RPostC組線粒體MDA活性均較空白對(duì)照組和假手術(shù)組明顯升高，SOD、Na+，K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和GSH-Px活性均明顯降低（P<0.05或

8、0.01）。與I/R組比較，RPostC組線粒體MDA活性明顯降低，SOD、Na+，K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和GSH-Px活性升高（P<0.05或0.01）。 結(jié)論： （1）肢體I-PostC可以減輕遠(yuǎn)隔器官腦的I/R損傷，從而證實(shí)了一種與缺血后處理相似的腦保護(hù)機(jī)制，即RPostC。 （2）肢體I-PostC誘導(dǎo)的RPostC可以減少糖尿病大鼠腦局灶性腦缺血再灌注損傷的腦梗死體積和神經(jīng)細(xì)胞凋亡，減輕糖尿病大

9、鼠腦組織和線粒體病理?yè)p傷程度。 （3）RPostC可以降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA活性，增加SOD、Na+，K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和GSH-Px活性，增強(qiáng)線粒體清除氧自由基的能力，減少脂質(zhì)過氧化物的生成，維持線粒體結(jié)構(gòu)及功能的完整，從而在亞細(xì)胞水平上發(fā)揮其缺血再灌注腦損傷的保護(hù)作用。 （4）本實(shí)驗(yàn)RPostC對(duì)神經(jīng)行為學(xué)未見明顯改善，尚需深入研究RPostC的最佳方案，使其減輕腦I/R損傷的病理?yè)p害的同時(shí)改善腦功能。