PBF在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移影響的研究.pdf

1、背景:
　　骨肉瘤是臨床常見的原發(fā)惡性骨腫瘤,高發(fā)于青少年,致死率高,手術(shù)及輔助治療后40％的患者仍出現(xiàn)了復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。而骨肉瘤的生物學(xué)治療因缺乏特異性腫瘤抗原而未見明顯進(jìn)展。本課題組在前期工作中通過SEREX方法,獲得并鑒定了一種新型骨肉瘤相關(guān)抗原基因PBF。乳頭瘤病毒結(jié)合因子(Papillomavirus Binding Factor,PBF)是一個含513個氨基酸可編碼一個鋅指結(jié)構(gòu)的核質(zhì)穿梭蛋白。它曾被證明是一種骨肉瘤相關(guān)抗原

2、,能被自體毒性T淋巴細(xì)胞克隆所識別?；谇捌谘芯炕A(chǔ),本試驗(yàn)擬設(shè)計(jì)闡明PBF在骨肉瘤組織中的表達(dá),進(jìn)一步探索其對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)的目的是探討PBF在骨肉瘤組織中的表達(dá)情況,分析其與骨肉瘤之間的相關(guān)聯(lián)系;構(gòu)建PBF表達(dá)載體,通過轉(zhuǎn)染改變細(xì)胞中PBF基因的表達(dá)水平,進(jìn)而觀察研究該基因?qū)侨饬黾?xì)胞的生物學(xué)功能會產(chǎn)生怎樣的影響,為PBF作為一種骨肉瘤早期診斷、預(yù)后判斷及特異性治療的腫瘤相關(guān)性抗原提

3、供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.免疫組織化學(xué)法檢測PBF在70例骨肉瘤和30例骨軟骨瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)水平,采用統(tǒng)計(jì)方法分析PBF表達(dá)與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系及意義。
　　2.構(gòu)建PBF過表達(dá)載體,并將其轉(zhuǎn)染到U2OS骨肉瘤細(xì)胞中,利用Western-blot方法檢測轉(zhuǎn)染過表達(dá)載體后細(xì)胞中PBF的表達(dá)情況。
　　3.MTT法繪制細(xì)胞增殖曲線檢測過表達(dá)PBF對骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力的影響;Transwell

4、實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)PBF對骨肉瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn):PBF在骨肉瘤中的陽性表達(dá)率為88.62%(62/70),在骨軟骨瘤中的陽性表達(dá)率為10%(3/30)。PBF在骨肉瘤中的陽性表達(dá)率顯著高于骨軟骨瘤,兩者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。PBF的表達(dá)與骨肉瘤患者的外科Enneking分期及是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移等因素呈正相關(guān)。
　　2.成功構(gòu)建PBF過表達(dá)載體,Western-blo

5、t方法檢測出使用PBF過表達(dá)載體結(jié)合脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染U2OS后,細(xì)胞內(nèi)PBF蛋白水平較對照組的細(xì)胞表達(dá)上調(diào)。
　　3.MTT檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn):上調(diào)PBF表達(dá)后,實(shí)驗(yàn)組U2OS細(xì)胞的增殖能力較對照組及空白組顯著增強(qiáng)。
　　4.Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):上調(diào)PBF表達(dá)后,實(shí)驗(yàn)組U2OS細(xì)胞的遷移和侵襲能力較對照組及空白組顯著增強(qiáng)。
　　結(jié)論:
　　1.在骨肉瘤組織中,PBF呈現(xiàn)陽性表達(dá),且其表達(dá)水平與骨肉瘤的惡性分期﹑轉(zhuǎn)