低溫有氧灌注對豬DCD供肝的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　世界范圍的器官極度短缺已經(jīng)成為制約器官移植發(fā)展的主要問題，由于移植技術(shù)和器官保存技術(shù)的提高，心死亡供者(donors of cardiac death，DCD)逐漸成為重要移植器官來源。20世紀(jì)80年代后歐美多家移植中心重新關(guān)注DCD以拓寬移植供者來源，為DCD器官移植揭開了新的篇章。近30年來，歐美的眾多移植中心、學(xué)術(shù)團(tuán)體和科研機(jī)構(gòu)致力于讓DCD更科學(xué)規(guī)范地為臨床服務(wù)。
　　而與DBD比較，DCD必須堅(jiān)持到無心

2、肺功能并宣布死亡之后才開始進(jìn)行器官獲取過程，供者器官經(jīng)歷了較長的熱缺血時間。器官獲取時段的組織缺氧、酸中毒、細(xì)胞間穩(wěn)態(tài)的破壞、炎性通路的大量激活成為DCD與DBD最大的區(qū)別。
　　熱缺血時間應(yīng)指心臟停搏至低溫灌注開始前的一段時間。澳大利亞＼新西蘭則要求肝移植WIT≤30分鐘;荷蘭要求WIT在150分鐘內(nèi);英國視熱缺血時間為收縮壓小于55mmHg至低溫灌注開始的一段時間，要求肝移植WIT≤20分鐘;此外，冷缺血時間(cold isc

3、hemia time，CIT)應(yīng)保持在最低水平，一般來說6-8小時內(nèi)可獲得較好的移植效果。有研究顯示:在肝移植中，熱缺血時間超過55分鐘，受者死亡風(fēng)險增加2倍，而冷缺血時間超過10小時，則顯著增加死亡風(fēng)險。
　　器官保存是器官移植的三大技術(shù)支柱之一。為了提高患者長期存活率、緩解供器官短缺的矛盾，移植臨床對器官保存技術(shù)提出了更高的要求。UW液(University of Wisconsin solution)是目前移植中器官保存液的

4、“金標(biāo)準(zhǔn)”，臨床應(yīng)用近20年，能夠有效保存肝臟、胰腺、腎臟。UW液含有非滲透性物質(zhì)包括乳糖酸、木棉糖、羥乙基淀粉，能夠抑制低溫保存期間細(xì)胞水腫，含有谷胱甘肽和腺苷，有助于提高移植物抵抗缺血/再灌注損傷的能力并維持細(xì)胞能量代謝。
　　然而，與DBD相比，DCD導(dǎo)致移植器官功能延遲(delayed graft function，DGF)，甚至原發(fā)性移植器官無功能(primary non function，PNF)的發(fā)生率明顯提高，使得

5、我們有必要去尋找一個新的器官保存方法。下一代器官保存技術(shù)將需要滿足兩大挑戰(zhàn)，以減少損傷的器官支持檢索和移植之間并提供一種可靠的方法的可行性測試適合于臨床應(yīng)用。低溫有氧灌注保存(hypothermic oxygenatedperfusion，HOPE)是符合上述的方法之一，本文就DCD小型豬肝臟低溫灌注保存的應(yīng)用及原理進(jìn)行進(jìn)一步的探討。
　　方法：
　　1、本DCD豬實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯儆贛-Ⅲ范疇，根據(jù)國外相關(guān)文獻(xiàn)報道，誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動物D

6、CD死亡有數(shù)種常用方法:窒息、放血、電擊等。因“窒息”法具有相對安全，可控性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，根據(jù)美國密歇根大學(xué)醫(yī)學(xué)院Obeid NR等提出的方案，本實(shí)驗(yàn)嘗試建立小型豬DCD模型，并為進(jìn)一步建立DCD豬器官灌注模型提供基礎(chǔ)。
　　2、本實(shí)驗(yàn)用Lifeport機(jī)為中國醫(yī)科大學(xué)器官移植實(shí)驗(yàn)室新近采購，曾用于低溫條件下人腎臟機(jī)械灌注。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)Jain S等和Shigeta T等實(shí)驗(yàn)參數(shù)，利用2臺lifeport機(jī)通過改良構(gòu)建DCD豬肝臟低溫機(jī)

7、械灌注系統(tǒng)。觀察，比較機(jī)械有氧灌注和傳統(tǒng)冷保存后的肝臟形態(tài)學(xué)和功能方面的變化。并且利用微量透析儀檢查肝組織內(nèi)代謝性生化指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：
　　1、本研究成功地創(chuàng)建了DCD小型豬模型。通過窒息法，創(chuàng)建模型過程順利。是一種可行的方法。同時發(fā)現(xiàn)，麻醉的深淺程度對模型的建立影響巨大，要盡量做到標(biāo)化。同時觀察到熱缺血時間30分鐘，肝臟已經(jīng)達(dá)到了廢棄的邊緣，熱缺血時限與澳大利亞等國的標(biāo)準(zhǔn)相符合。
　　2、本實(shí)驗(yàn)利用2臺Lif

8、eport機(jī)通過改良構(gòu)建了豬DCD供肝低溫有氧機(jī)械灌注系統(tǒng)。本灌注系統(tǒng)具有壓力控制，溫度控制，參數(shù)實(shí)時連續(xù)監(jiān)測，集成自動除泡功能，脈沖式灌注等優(yōu)點(diǎn)。比較機(jī)械有氧灌注和傳統(tǒng)冷保存后的肝臟形態(tài)學(xué)和功能方面的變化;利用微量透析儀檢查肝組織內(nèi)代謝性生化指標(biāo)的變化，均得出了機(jī)械有氧灌注要明顯好于傳統(tǒng)冷保存的結(jié)論。
　　3、利用微量透析儀，我們了解到一部分肝組織內(nèi)代謝指標(biāo)的變化。
　　結(jié)論：
　　1、本實(shí)驗(yàn)利用2臺Lifeport