膿毒癥大鼠血清Ang-2的動(dòng)態(tài)變化及其與膿毒癥肺損傷的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　血管生成素-2（Angiopoietin-2，Ang-2）是由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成并儲(chǔ)存于內(nèi)皮細(xì)胞特有的懷布爾一帕拉德小體(Weibel-Palade小體)，它可以造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，內(nèi)皮屏障破壞，微血管滲漏，組織水腫，組織損傷。對(duì)嚴(yán)重膿毒癥肺毛細(xì)血管高通透性具有重要病理作用，可以作為反映肺血管通透性的生物標(biāo)志物，目前臨床尚未監(jiān)測其動(dòng)態(tài)變化。本研究建立兩組膿毒癥大鼠模型，使其24小時(shí)死亡率明顯不同，檢測兩組大鼠發(fā)病過程中

2、不同時(shí)間點(diǎn)血清血管生成素-2水平，繪制Ang-2動(dòng)態(tài)變化曲線;比較不同組間大鼠血清Ang-2水平差異;初步探討膿毒癥大鼠血清Ang-2水平與膿毒癥介導(dǎo)急性肺損傷(acute lung injuryinduced by sepsis，sepsis ALI)的關(guān)系，為進(jìn)一步臨床研究提供依據(jù)。
　　方法:
　　雄性SD大鼠62只，體重180-220g，分2部分，第1部分用于繪制膿毒癥大鼠Ang-2動(dòng)態(tài)變化曲線，共32只，隨機(jī)分為對(duì)

3、照組（C組）6只，給予麻醉后不做任何處理;假手術(shù)組（O組）6只，開腹翻動(dòng)盲腸后直接關(guān)腹;膿毒癥1組(S1組)10只，行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture，CLP)，距盲腸遠(yuǎn)端1cm處結(jié)扎，16G針頭貫通穿刺1次;膿毒癥2組（S2組）10只，行CLP術(shù)，距盲腸遠(yuǎn)端2cm處結(jié)扎，16G針頭貫通穿刺2次。分別于造模成功后0h、3h、6h、12h、18h、24h、36h、48h、72h毛細(xì)管內(nèi)眥取血0.3mL

4、/次，離心取血清采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清Ang-2水平，從而觀察各模型組Ang-2動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。第2部分用于研究Ang-2水平與膿毒癥肺損傷的關(guān)系，共30只，隨機(jī)分5組，每組6只(n=6)，造膿毒癥肺損傷模型，造模方法與S2組相同，分組為L0、L3、L6、L12、L18組，相應(yīng)于造模后0h、3h、6h、12h、18h分別腹主動(dòng)脈取血，ELISA法檢測血

5、清Ang-2水平，行動(dòng)脈血?dú)夥治觯》谓M織計(jì)算肺系數(shù)，病理切片HE染色觀察肺組織損傷程度。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定性資料采用x2檢驗(yàn)，定量資料采用t或F檢驗(yàn)，不同組間相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)血清Ang-2水平比較采用重復(fù)測量資料方差分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.C組及O組72小時(shí)內(nèi)均無大鼠死亡，72h死亡率為0;S1組16h內(nèi)無死亡，24h內(nèi)死亡2只，死亡率20％，

6、72小時(shí)內(nèi)死亡3只，死亡率30％;S2組16小時(shí)內(nèi)無死亡，18小時(shí)后開始大量死亡，24小時(shí)內(nèi)死亡9只，死亡率90％，72小時(shí)內(nèi)全部死亡，死亡率100％。S2組24h及72h大鼠死亡率顯著高于S1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。第二部分，L12、L18組出現(xiàn)呼吸困難，腹瀉，耳部皮膚蒼白，尾巴冰涼，肢端青紫，腹腔出現(xiàn)臭味，有膿性液體，結(jié)扎盲腸變黑，與周圍組織及腸管不同程度粘連，肺組織充血水腫，包膜緊張，氧合指數(shù)小于300，肺組織病理顯

7、示肺泡間隔有所增厚，間質(zhì)明顯充血水腫，一定量中性粒細(xì)胞浸潤，少量肺泡萎縮塌陷，氣道內(nèi)含有少量分泌物證實(shí)膿毒癥肺損傷模型造模成功。
　　2.各模型組Ang-2的動(dòng)態(tài)變化:C組0h Ang-2水平為(1.57±0.09)ng/mL，隨著時(shí)間進(jìn)展，不同時(shí)間點(diǎn)Ang-2水平無顯著性差異(P＞0.05)。O組0h Ang-2水平為(1.55±0.32) ng/mL，6h開始明顯升高為(2.09±0.20) ng/mL，與0h值相比差異有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義(P＜0.01)，12h達(dá)到最高值(2.65±0.23) ng/mL，此后Ang-2水平開始下降，至48h恢復(fù)到0h水平并持續(xù)至72小時(shí)后，與0h值相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。S1組0h Ang-2水平為(1.67±0.18)ng/mL，3h開始明顯升高為(2.31±0.22) ng/mL，與0h值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，隨病程進(jìn)展逐漸升高至12h達(dá)到最高值為(3.57±0.39) ng/mL，并開始下降，

9、48h下降至到最低，但仍高于0h值，方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。S2組大鼠18小時(shí)后開始大量死亡，所以曲線繪至18小時(shí)，0h值為(1.56±0.16) ng/mL，3h開始明顯升高為(2.27±0.32) ng/mL，與0h值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，12h達(dá)最高值(3.44±0.42) ng/mL后開始下降，至18h仍高于0h值，方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。O組、S1組、S2組血清Ang-2水平

10、均在12h達(dá)到最高值，方差分析顯示此時(shí)間點(diǎn)S1組與S2組Ang-2水平無顯著性差異(P＞0.05)，S1組及S2組均顯著高于O組(P＜0.01)，O組顯著高于C組(P＜0.01)。
　　3.膿毒癥肺損傷模型組大鼠L0、L3、L6組氧合指數(shù)，肺系數(shù)各組兩兩比較差異無顯著性(P＞0.05)，肺組織病理示:結(jié)構(gòu)清楚，肺間質(zhì)僅有少許炎性細(xì)胞，肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)未見水腫液及肺泡萎陷;L12組氧合指數(shù)＜300，肺系數(shù)較L0組增加，差異有統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，肺組織病理示:肺泡間隔有所增厚，間質(zhì)明顯充血水腫，一定量中性粒細(xì)胞浸潤，少量肺泡萎縮塌陷，氣道內(nèi)含有少量分泌物。L18組氧合指數(shù)＜200，肺系數(shù)較L12組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，肺組織病理示:肺泡間隔明顯增厚，結(jié)構(gòu)紊亂，間質(zhì)充血水腫，大量中性粒細(xì)胞浸潤，大量肺泡萎縮塌陷，氣道內(nèi)充滿紅色分泌物。血清Ang-2水平在L0組為(1.49±0.21)ng/mL，L3組為(2.34±0.25)ng/mL，

12、較L0組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，L6組較L3組顯著升高，L12組達(dá)最高值為(3.47±0.41) ng/mL，L18組較L12組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，但L18組仍顯著高于L0組。
　　結(jié)論:
　　在膿毒癥大鼠模型發(fā)病過程中血清Ang-2的水平具有一定的規(guī)律性，從3小時(shí)開始升高，在12h達(dá)到高峰，之后有所下降但仍高于正常值。血清Ang-2水平在肺損傷出現(xiàn)之前明顯升高，參與肺損傷病變過程，可以作