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1、目的:明確骨關(guān)節(jié)炎中骨橋蛋白的表達(dá)是否受到Wnt/β-catenin信號(hào)通路中β-catenin/TCF-4復(fù)合體調(diào)控,并探討其相關(guān)調(diào)控機(jī)理,為尋找防治OA的安全有效的靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
方法:體外培養(yǎng)人OA軟骨細(xì)胞和正常關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,1、RealTime-PCR檢測(cè)β-catenin和OPN在第一代OA和正常軟骨細(xì)胞中的mRNA表達(dá)水平;2、取第二代OA軟骨細(xì)胞,分為實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組,Wnt/β-catenin信號(hào)通路
2、負(fù)性調(diào)節(jié)因子DKK-1下調(diào)實(shí)驗(yàn)組β-catenin表達(dá)后,Real Time-PCR和Western Blot檢測(cè)OPN mRNA和蛋白表達(dá)水平;3、取第二代OA軟骨細(xì)胞,分為TCF-4 siRNA干擾組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組,利用siRNA抑制TCF-4表達(dá)后,RealTime-PCR和Western Blot檢測(cè)TCF-4和OPN mRNA和蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果:⑴OA軟骨細(xì)胞β-catenin和OPN mRNA表達(dá)
3、均高于正常軟骨細(xì)胞(p<0.01);⑵DKK-1下調(diào)β-catenin表達(dá)后,OA軟骨細(xì)胞OPN mRNA和蛋白表達(dá)均降低(p<0.01);⑶siRNA干擾TCF-4后,OA軟骨細(xì)胞TCF-4和OPN mRNA與蛋白表達(dá)均降低(p<0.05)。
結(jié)論:①DKK-1可抑制OA軟骨細(xì)胞OPN表達(dá);②TCF-4 siRNA可抑制OA軟骨細(xì)胞OPN表達(dá);③Wnt/β-catenin信號(hào)通路通過TCF-4/β-catenin復(fù)合體可
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