粘結(jié)劑直接蓋髓體外實驗研究.pdf

1、研究目的：采用體外培養(yǎng)模型方法,評價自酸蝕粘結(jié)劑直接蓋髓后的牙髓的反應(yīng)，探討粘結(jié)劑蓋髓的作用機理 材料與方法：本實驗研究分為三個部分 1．第一部分 直接蓋髓體外培養(yǎng)模型的建立與形態(tài)學(xué)觀察比較研究： 1.1 體外蓋髓培養(yǎng)模型的建立及檢測 目的：建立體外蓋髓模型，為以后的實驗研究提供研究模型，并采用組織化學(xué)技術(shù)進行形態(tài)學(xué)檢測。 方法：收集因正畸拔除的健康新鮮完整的前磨牙20顆，隨機分為兩組，氫氧化鈣蓋

2、髓組和無任何處理對照組，一組于牙合面制備Ⅰ類洞，機械穿髓，氫氧化鈣蓋髓，復(fù)合樹脂充填窩洞，余一組不作任何處理，光固化塑膠包埋，精密切割機切割成約2毫米厚的牙片，置培養(yǎng)液中培養(yǎng)3、7、14、21天，分別進行組織化學(xué)檢測。 結(jié)果：兩組均可成功培養(yǎng)至14天，氫氧化鈣組3-14天呈現(xiàn)蓋髓后的組織損傷以及隨后的修復(fù)狀態(tài)，對照組3-14天均呈牙本質(zhì)、牙髓的有序結(jié)構(gòu)；21天時兩組牙髓均出現(xiàn)退行性改變。 結(jié)論：通過本實驗成功建立起體外蓋

3、髓培養(yǎng)模型。 1.2 自酸蝕粘結(jié)劑蓋髓后組織病理學(xué)觀察研究 目的：采用器官培養(yǎng)模型方法,從組織病理學(xué)角度評價自酸蝕粘結(jié)劑直接蓋髓后的牙髓反應(yīng)。 方法：采用上述體外蓋髓培養(yǎng)模型，設(shè)立三組：自酸蝕粘結(jié)劑蓋髓實驗組，氫氧化鈣蓋髓陽性對照組和正常無處理陰性對照組，并取培養(yǎng)3、7、14天的標(biāo)本，采用組織化學(xué)技術(shù)，從炎癥反應(yīng),組織破壞程度,修復(fù)性牙本質(zhì)形成等方面,觀察自酸蝕粘結(jié)劑蓋髓后牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的反應(yīng)。 結(jié)果：

4、蓋髓后三天，實驗組和陽性對照組分別出現(xiàn)急性炎癥和凝固壞死層等表現(xiàn)；蓋髓后7天，組織呈現(xiàn)積極的增生修復(fù)狀態(tài)；蓋髓后十四天，大部分細(xì)胞恢復(fù)正常形態(tài)，組織呈恢復(fù)狀；兩組均無牙本質(zhì)橋的形成，陰性對照組則呈牙本質(zhì)，牙髓的有序結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：從組織病理學(xué)角度來看，自酸蝕粘結(jié)劑和氫氧化鈣在短期內(nèi)具有相似的蓋髓效果。 2．第二部分 牙本質(zhì)涎磷蛋白在蓋髓體外培養(yǎng)研究模型中的定位與定量表達(dá)研究 目的：觀察并檢測牙本質(zhì)涎磷蛋白在自酸蝕粘

5、結(jié)劑直接蓋髓后的表達(dá)情況，探討其在修復(fù)性牙本質(zhì)形成中的作用。 方法：采用上述體外培養(yǎng)模型，取培養(yǎng)3、7、14天的標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)定位檢測牙本質(zhì)涎磷蛋白；取培養(yǎng)3天的標(biāo)本，采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)方法定量檢測其表達(dá)，觀察并比較實驗組和對照組蓋髓后牙本質(zhì)涎磷蛋白的表達(dá)情況，探討其在修復(fù)性牙本質(zhì)形成中的作用。 結(jié)果：免疫組織化學(xué)化結(jié)果：實驗組和氫氧化鈣組第三天均出現(xiàn)牙本質(zhì)涎磷蛋白陽性表達(dá)，第七天和第十四天，三組均呈陰性

6、結(jié)果。逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)結(jié)果：氫氧化鈣組比粘結(jié)劑組表達(dá)量稍高，組間比較無顯著差異，正常對照組低表達(dá)。 結(jié)論：牙本質(zhì)涎磷蛋白可能在牙齒早期損傷修復(fù)中起作用。 3．第三部分 白細(xì)胞介素IL-1β在蓋髓模型中的表達(dá)研究 目的：觀察炎癥介質(zhì)白細(xì)胞介素IL-1β在自酸蝕粘結(jié)劑蓋髓后的表達(dá)情況，比較其與氫氧化鈣材料對組織的刺激大小。 方法：分為自酸蝕粘結(jié)劑組，氫氧化鈣組，陰性對照組，進行體外模型培養(yǎng)3，7，14天，采

7、用酶聯(lián)免疫吸附試驗方法檢測炎性介質(zhì)白細(xì)胞介素IL-1β的表達(dá)情況，并比較材料對組織的刺激大小。 結(jié)果：氫氧化鈣組和粘結(jié)劑組白細(xì)胞介素IL-1β表達(dá)高于正常對照組，氫氧化鈣組和粘結(jié)劑組兩組間表達(dá)無顯著差異。 結(jié)論：粘結(jié)劑和氫氧化鈣在短期內(nèi)對牙髓組織都有一定的炎性刺激。 4．結(jié)論：粘結(jié)劑蓋髓后牙髓的短期反應(yīng)，包括組織病理學(xué)觀察，牙本質(zhì)涎磷蛋白的表達(dá)以及IL-1β的表達(dá)和氫氧化鈣組相比較無顯著差異，可作為牙齒蓋髓治療的