鼻咽癌細(xì)胞株Syk基因啟動(dòng)子甲基化的研究.pdf

1、目的：探討鼻咽癌細(xì)胞株Syk基因啟動(dòng)子甲基化與其mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)情況之間的關(guān)系。
　　 方法：培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1(高分化)、CNE-2(低分化)和永生化非癌性人鼻咽粘膜上皮細(xì)胞株(NP69)。
　　 (1)甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Methylation-specific PCR，MSP)法檢測各細(xì)胞株中Syk基因的甲基化程度，分析Syk基因啟動(dòng)子甲基化程度與鼻咽癌惡性程度之間的關(guān)系。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS

2、17軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示，應(yīng)用單因素方差分析比較3株細(xì)胞株Syk啟動(dòng)子甲基化率。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)Q-RT-PCR法檢測各株細(xì)胞中Syk基因mRNA表達(dá)水平，分析Syk基因mRNA表達(dá)水平與鼻咽癌惡性程度之間的關(guān)系。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用單因素方差分析比較各細(xì)胞株Syk m

3、RNA表達(dá)情況。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (3)Western Blot方法檢測各細(xì)胞株中Syk蛋白表達(dá)情況，分析Syk蛋白表達(dá)水平與鼻咽癌惡性程度之間的關(guān)系。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示，應(yīng)用單因素方差分析比較各細(xì)胞株Syk蛋白表達(dá)情況。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 (1)MS-PCR法檢出CNE

4、-1和CNE-2細(xì)胞Syk啟動(dòng)子甲基化率分別為36％±3.6％和62％±4.5％，而NP69未檢測到甲基化。
　　 (2)Q-RT-PCR法檢出Syk mRNA在CNE-1和CNE-2的表達(dá)水平均低于NP69細(xì)胞，分另0為42％±3.5％和28％±2％。
　　 (3)Western Blot法檢出Syk蛋白在CNE-1和CNE-2的表達(dá)水平均低于NP69細(xì)胞，分別為36％±4.5％和16％±2.5％。
　　 結(jié)論

5、：
　　 1.NP69細(xì)胞株的Syk mRNA表達(dá)明顯高于2株鼻咽癌細(xì)胞株，且高分化CNE-1Syk mRNA表達(dá)高于CNE-2，提示Syk mRNA表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞株的分化程度高低呈正相關(guān)。
　　 2.NP69細(xì)胞株Syk蛋白表達(dá)高于2株鼻咽癌細(xì)胞株，高分化CNE-1 Syk蛋白表達(dá)高于CNE-2，提示Syk蛋白表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞株的分化程度高低也呈正相關(guān)。
　　 3.NP69細(xì)胞株中檢測不到Syk基因啟動(dòng)子甲基