灰樹(shù)花胞外多糖的分離純化及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本論文針對(duì)灰樹(shù)花深層發(fā)酵胞外多糖進(jìn)行分離純化,以研究它的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)。同時(shí),通過(guò)開(kāi)展多項(xiàng)免疫實(shí)驗(yàn)探討該胞外多糖的免疫活性及作用機(jī)理,為開(kāi)發(fā)新的多糖免疫調(diào)節(jié)功能型產(chǎn)品提供理論基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)液體深層發(fā)酵培養(yǎng),并采用醇沉法獲得灰樹(shù)花胞外粗多糖(CGFP),該粗多糖經(jīng)酶-sevag脫蛋白、AB-8大孔吸附樹(shù)脂脫色、超濾以及Sephadex G-100凝膠柱進(jìn)行進(jìn)一步分離純化,得到兩種純化組分GFP-A、GFP-B,利用MTT法檢

2、測(cè)兩組分對(duì)RAW264.7細(xì)胞的增殖活性,篩選出具有較高免疫活性組分GFP-A,并通過(guò)Sephadex G-75和HPLC兩種方法鑒定GFP-A為宏觀均一組分,同時(shí)測(cè)得GFP-A分子量約為37kDa。理化性質(zhì)結(jié)果表明,GFP-A是一種含有α-D葡萄糖苷鍵和吡喃糖環(huán)的非淀粉類、不含多酚類物質(zhì)、蛋白和核酸的中性多糖。氣相結(jié)果說(shuō)明其單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩爾比為0.28∶0.31∶0.30∶0.06∶7.9

3、8∶0.61。
　　由不同濃度和不同作用時(shí)間研究GFP-A對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖活性的影響,MTT結(jié)果表明GFP-A均能夠促進(jìn)RAW264.7的細(xì)胞增殖,當(dāng)GFP-A濃度為80μg/mL,作用48h時(shí),細(xì)胞增殖指數(shù)達(dá)到最大值,為137.5％,并且在一定的濃度以及時(shí)間范圍內(nèi),分別呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴和時(shí)間依賴性。掃描電鏡結(jié)果顯示GFP-A具有促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞活化的作用,AO染色結(jié)果表明GFP-A能夠激活RAW264.7細(xì)