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文檔簡介
1、Wnt通路參與生物的發(fā)育和腫瘤的發(fā)生,近年來Wnt通路中一些成分在腫瘤發(fā)生過程中的作用已得到確認(rèn),特別是APC和β-catenin與腫瘤發(fā)生的關(guān)系已有大量的報(bào)道,但Wnt通路的上游成分Wnt和研究報(bào)道不多,本課題擬通過RT-PCR檢測結(jié)直腸澡中Wnt10A mRNA的表達(dá)情況,以了解Wnt基因在結(jié)直腸癌發(fā)生中的作用.30例新鮮結(jié)直腸癌標(biāo)本,分別于距腫瘤邊緣5cm外及腫瘤處分別取1.0×0.3×0.3cm的組織塊,結(jié)直腸癌都經(jīng)病理證實(shí).按
2、照Trizol試劑盒的說明提取結(jié)直腸癌組織及正常組織中的總mRNA,用隨機(jī)引物Oligo dT按照試劑合成cDNA第一條鏈的要求合成cDNA,RT反應(yīng)產(chǎn)物用作PCR的模板DNA.使用特異性引物進(jìn)行PCR,條件是94℃預(yù)變性5分鐘,94℃變性40秒,60℃退火40秒;72℃延伸1min;循環(huán)參數(shù)35,72℃末次延伸7min.β-actin基因作為內(nèi)對照.取10μ1 PCR產(chǎn)物在2﹪瓊脂凝膠電泳,紫外線燈下觀察電泳帶,凝膠成像分析系統(tǒng)掃描拍
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