馬鈴薯紡錘塊莖類病毒的RT-PCR檢測及試管薯工廠化生產(chǎn)技術(shù)研究.pdf

1、以感染PSTVd的馬鈴薯試管苗及塊莖和健康的試管苗及塊莖為材料，對提取植物總 RNA的兩種方法進(jìn)行了比較，結(jié)果表明：酚/SDS法和試劑盒法對感病馬鈴薯試管苗的提取均獲得了純度高、完整性好的總RNA；對感病塊莖提取時試劑盒法獲得了純度高、完整性好的總RNA，而酚/SDS法提取時不能有效地除去塊莖中蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。酚/SDS法提取試管苗總RNA，擴(kuò)增電泳后觀察結(jié)果好于試劑盒法，而以未感病試管苗擴(kuò)增產(chǎn)物為對照，未得到任何產(chǎn)物。
　　以總R

2、NA為模板，進(jìn)行cDNA合成及PCR擴(kuò)增，從感病組織擴(kuò)增到一段約為359bp的特異RNA擴(kuò)增產(chǎn)物，與理論設(shè)計大小一致，而健康組織無此擴(kuò)增產(chǎn)物。從而在基因水平上為PSTVd的檢測提供了快速、靈敏、簡便的新手段。利用該方法檢測了延邊農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院保存的187份國內(nèi)外馬鈴薯品種（系）資源試管苗及薯塊，檢測結(jié)果：有28份馬鈴薯品種/系資源感染了馬鈴薯PSTVd。
　　早熟馬鈴薯品種“Favorita”和晚熟馬鈴薯品種“延薯4號”在液體和固

3、體兩種不同培養(yǎng)方式和不同營養(yǎng)元素含量培養(yǎng)條件下，比較植株生育和干物質(zhì)積累狀況的影響，結(jié)果表明：馬鈴薯植株在試管培養(yǎng)條件下，其植株生育隨著培養(yǎng)基中營養(yǎng)元素的增加其生長勢和干物質(zhì)積累也增加，液體時趨勢更明顯。2倍的MS液體培養(yǎng)基在試管苗壯苗培養(yǎng)上效果最佳。
　　在適宜的環(huán)境條件下，馬鈴薯試管薯膨大是受內(nèi)源激素和外源激素控制，為明確不同外源激素對試管苗結(jié)薯的作用機(jī)理，比較了基本培養(yǎng)基的不同濃度處理組合、激素種類和濃度對晚熟馬鈴薯品種延薯

4、4號試管薯形成的影響，結(jié)果表明：用2MS培養(yǎng)基壯苗，經(jīng)誘導(dǎo)后的結(jié)薯率和單薯重均增加。細(xì)胞分裂素能促進(jìn)試管薯的形成和發(fā)育，其中以6BA效果最顯著，表現(xiàn)在薯塊重和結(jié)薯數(shù)同時增加上。香豆素和 CCC對試管薯發(fā)育效果不明顯。誘導(dǎo)培養(yǎng)基選用 MS+6BA5.0+8％白糖對晚熟馬鈴薯品種延薯4號試管薯誘導(dǎo)率高，且結(jié)薯大。
　　為了馬鈴薯試管薯工廠化生產(chǎn)，我們做了試管薯生產(chǎn)的優(yōu)化試驗，試驗結(jié)果表明：在2MS培養(yǎng)基中壯苗，是獲得試管薯高產(chǎn)的必要前