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1、目的:研究低氧條件下,蛋白異戊烯轉(zhuǎn)移酶GGT對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響及機(jī)制,為膠質(zhì)瘤的基因治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:(1)用氯化鈷(CoCl2)處理細(xì)胞得到化學(xué)性低氧模型,用免疫印跡法(WB)檢測(cè)HIF-1α水平以明確低氧模型是否成功;劃痕實(shí)驗(yàn)或Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移侵襲能力;明膠酶譜法檢測(cè)MMP2活性水平;細(xì)胞貼壁實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞粘附能力;WB檢測(cè)Cadherin水平。(2)WB和免疫熒光
2、法檢測(cè)低氧條件下GGT特異性β啞基的水平。(3)低氧條件下,用siRNA下調(diào)GGTβ表達(dá),或用GGT特異性抑制劑GGTI-2147處理腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞,WB檢測(cè)GGTβ和HIF-1α的水平。(4)低氧條件下,下調(diào)GGTβ表達(dá)和GGTI-2147處理后,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的侵襲遷移能力。
結(jié)果:(1)化學(xué)性低氧條件下,腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞侵襲遷移能力降低,粘附能力升高。(2)化學(xué)性低氧條件下,
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