胡麻轉(zhuǎn)錄因子ABI3的克隆及功能分析.pdf

1、胡麻是我國(guó)主要油料作物之一，是我國(guó)工業(yè)用干性植物油和產(chǎn)區(qū)群眾主要食用油的來源。胡麻籽具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。近年來由于人們生活水平得到不斷提高，胡麻油由于其優(yōu)良的品質(zhì)被人們所逐漸熟知，相關(guān)的基礎(chǔ)研究也在逐步開展中。轉(zhuǎn)錄因子ABI3(abscisic acid-insensitive3)是含有植物特有的B3結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，參與種子的發(fā)育、休眠，并且是ABA信號(hào)途徑的中心調(diào)控因子，另外也參與了脂肪酸的代謝。本研究主要以胡麻張亞2號(hào)為

2、材料，研究了ABI3在胡麻基因組中的分布及相關(guān)功能分析，主要結(jié)果如下:
　　1.在張亞2號(hào)中成功克隆了轉(zhuǎn)錄因子ABI3的基因組序列和CDS序列，通過測(cè)序發(fā)現(xiàn)胡麻ABI3有三個(gè)轉(zhuǎn)錄本。
　　2.在張亞2號(hào)的不同組織和不用時(shí)期的蒴果中對(duì)ABI3的三個(gè)不同轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行內(nèi)源表達(dá)的分析，結(jié)果顯示三個(gè)轉(zhuǎn)錄本在不同組織部位均有表達(dá)，并且三個(gè)轉(zhuǎn)錄本在蒴果的成熟過程中所扮演的角色有所差別。
　　3.分別構(gòu)建了針對(duì)3個(gè)轉(zhuǎn)錄本的亞細(xì)胞定位載體

3、，亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示LuABI3-W1，LuABI3-W2定位在細(xì)胞核，而LuABI3-W3無定位信號(hào)，說明LuABI3-W3無功能。
　　4.分別構(gòu)建針對(duì)3個(gè)轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化擬南芥植株。T2代轉(zhuǎn)基因植株表型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在ABA信號(hào)途徑中LuABI3-W1和LuABI3-W2兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本響應(yīng)植物激素ABA，并且促進(jìn)種子的萌發(fā)，而LuABI3-W3不響應(yīng)植物激素ABA。這些研究結(jié)果表明LuABI3-W1和LuABI3-W2兩個(gè)轉(zhuǎn)

4、錄本參與ABA信號(hào)途徑，并且在外施ABA時(shí)減少種子的休眠促進(jìn)萌發(fā)。
　　5.生物信息學(xué)分析表明3個(gè)轉(zhuǎn)錄本由兩個(gè)胡麻基因轉(zhuǎn)錄而來。因此本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步克隆了張亞2號(hào)基因組中兩個(gè)啟動(dòng)子并分別構(gòu)建promoter: GUS載體轉(zhuǎn)化擬南芥。T1代擬南芥植株GUS染色檢測(cè)結(jié)果顯示啟動(dòng)子ProLuABI3-W1和啟動(dòng)子ProLuABI3-W2/3具有活性，并且在地上部分表達(dá)。
　　6.本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究了植物激素ABA對(duì)LuABI3-W1，L