鹿源布魯氏菌外膜蛋白Omp31基因的克隆與原核表達.pdf

1、布魯氏菌病(Brucellosis)是由布魯氏菌(Brucella)引起的人畜共患傳染病，主要宿主是羊、牛和豬，呈世界范圍流行，并且鹿場感染布魯氏菌的現(xiàn)象逐漸增多。近幾年來，布魯氏菌病在中國的流行呈上升趨勢，嚴重危害了畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康。目前，對易感動物進行疫苗免疫和對患病動物進行撲殺是防控布魯氏菌病的有效手段。所以，利用生物學手段研制出高效、安全的疫苗，并迅速對布魯氏菌病進行準確診斷是預防布魯氏菌病的關(guān)鍵。
　　在布魯氏菌眾多

2、具有抗原保護作用的外膜蛋白中，Omp31作為布魯氏菌的免疫保護性抗原，能誘導機體產(chǎn)生中和抗體，是基因工程疫苗的理想候選基因，也是用于布魯氏菌臨床診斷的首選基因和蛋白。此外，外膜蛋白Omp31是布魯氏菌的毒力基因，高度保守，Omp31基因的缺失可降低布魯氏菌的毒力，所以可以通過缺失Omp31基因來研制基因缺失疫苗。本研究從疑似感染布魯氏菌的鹿病料中提取基因組DNA，經(jīng)PCR擴增和TA克隆，構(gòu)建克隆載體pMD18T-Omp31，經(jīng)轉(zhuǎn)化和提取

3、質(zhì)粒，以及BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切，將獲得的Omp31基因亞克隆至pET28a原核表達載體，構(gòu)建pET28a-Omp31原核表達載體，將其轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21感受態(tài)，經(jīng)IPTG誘導，使Omp31基因在大腸桿菌BL21感受態(tài)中表達，并經(jīng)Western Blot確定該重組蛋白的反應原性。結(jié)果顯示，本研究成功構(gòu)建了原核表達載體pET28a-Omp31，經(jīng)IPTG誘導，其可在大腸桿菌BL21感受態(tài)中獲得穩(wěn)定表達，Omp31重組蛋白以包涵體形