大鼠局灶性腦缺血誘導(dǎo)VEGF及HIF-1α表達(dá)的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠局灶性腦缺血誘導(dǎo)VEGF及HIF1α表達(dá)的研究姓名：宋芷珩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張朝東20030401實(shí)驗(yàn)材料與方法1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：健康雄性Wistar大鼠50只，均由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)前體重(270410)克。隨機(jī)分成免疫組化方法試驗(yàn)組和RT—PCR方法試驗(yàn)組兩個(gè)試驗(yàn)組組成：①免疫組化組(1—5組)：5組分別對(duì)應(yīng)有假手術(shù)組、局灶腦缺血再灌4h組、8h組、24h組和72h

2、組等時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)11=5；②RT—FCR組(1—5組)：5組同免疫組化組，即分別對(duì)應(yīng)有假手術(shù)組、局灶腦缺血再灌4h組、8h組、24h組和72h組等時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n=5。2方法：采用ZeaLonga改良的動(dòng)脈線栓法制備大鼠局灶腦缺血再灌模型，大鼠于MCA阻斷2小時(shí)，按再灌注不同時(shí)間即4h、8h、24h、72h等時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦。(1)免疫組化各組大鼠在規(guī)定的時(shí)間用10％水合氯醛麻醉，4％多聚甲醛一001MPBS液(PH值74)固定

3、后取材，石蠟包埋，連續(xù)切片，常規(guī)HE染色切片；免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)VEGF、HIF一1d蛋白。應(yīng)用MetanlorphImagingSystemV46軟件分別測(cè)定VEGF、HIF一1d陽(yáng)性反應(yīng)物平均面密度值，對(duì)各時(shí)間點(diǎn)VEGF、HIF一1o【免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞與假手術(shù)組比較定量分析，進(jìn)行方差檢驗(yàn)。(2)①RT—PCR各組在規(guī)定的時(shí)間迅速斷頭取腦，剝?nèi)“氚祹У哪X皮質(zhì)組織于一72。C冰箱中凍存；②大鼠腦組織總RNA的提?。喝?00mg組