高溫脅迫下平菇蛋白組學(xué)研究及抗性分析.pdf

1、平菇是我國廣泛栽培的食用菌，其營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值深受廣大消費(fèi)者青睞。但在園藝設(shè)施條件下生產(chǎn)平菇，時(shí)常遭遇高溫的突襲，導(dǎo)致菌絲活力下降，易遭遇木霉侵染，出菇推遲甚至嚴(yán)重減產(chǎn)，因此高溫是阻礙平菇生長和發(fā)育的主要因素之一。蛋白質(zhì)組學(xué)作為功能基因組學(xué)研究的重要組分及生命生理機(jī)制研究的重要技術(shù)，已成功運(yùn)用到食用菌各種機(jī)制的研究中。
　　高溫脅迫下平菇菌絲的響應(yīng)途徑、耐熱性機(jī)理以及易遭木霉侵染等問題還尚不明確，因此本研究進(jìn)行了高溫脅迫條件優(yōu)化

2、、蛋白質(zhì)差異表達(dá)和木霉侵染率的研究，旨在揭示高溫脅迫響應(yīng)機(jī)制，為選育具優(yōu)良農(nóng)藝性狀的耐性品種提供理論基礎(chǔ)。結(jié)果如下:
　　(1)以糙皮側(cè)耳（P.ostreatus）CCMSSC00389，CCMSSC00374;白黃側(cè)耳(P.cornucopiae)CCMSSC03989, CCMSSC00358, CCMSSC00329, CCMSSC00406, CCMSSC00360, CMSSC00798, CCMSSC00324, CC

3、MSSC00502,CCMSSC00454等11株菌株為材料，以硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物(TBARS)含量和生長恢復(fù)率為主要生理指標(biāo)，確定菌齡3d、最適溫度+12℃高溫脅迫處理48h為最優(yōu)高溫脅迫條件;
　　(2)利用iTRAQ結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)分析不同處理下(40℃高溫脅迫48h菌絲和對照、高溫脅迫恢復(fù)生長3d菌絲和對照)糙皮側(cè)耳CCMSSC00389蛋白質(zhì)的差異表達(dá)，共鑒定到686種蛋白質(zhì)，204個(gè)蛋白質(zhì)有顯著性差異，其中共

4、同表達(dá)的47個(gè)，單獨(dú)對應(yīng)熱激和恢復(fù)表達(dá)的分別是84個(gè)和73個(gè);GO分析表明，差異蛋白可分為23個(gè)功能分類，熱脅迫中起主導(dǎo)作用的為蛋白調(diào)控、應(yīng)激反應(yīng)、運(yùn)輸途徑等功能，亞細(xì)胞定位分析得出起主導(dǎo)作用的蛋白主要分布在線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、分泌途徑及過氧物酶體中;
　　(3)通過熒光定量RT-PCR驗(yàn)證了四個(gè)熱激蛋白家族基因的轉(zhuǎn)錄情況，hsp60、grp78、hsp90、hsp104經(jīng)過40℃高溫脅迫處理48h后分別上調(diào)28倍、6倍、10倍、15

5、倍，恢復(fù)培養(yǎng)3d后基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)量與對照無顯著性差異，表明HSPs表達(dá)量的增加主要由Hsps基因在高溫脅迫下轉(zhuǎn)錄表達(dá)量顯著上調(diào)引起的，對菌絲抗高溫脅迫起到重要作用;
　　(4)11個(gè)平菇菌株對木霉抗性具有一定的差異，對峙培養(yǎng)7d后CCMSSC00360，CCMSSC00324，CCMSSC00329侵染率低于60％，對木霉表現(xiàn)出一定的抗性，CCMSSC03989和CCMSSC00406受侵染面積達(dá)100％，不具抗木霉性;糙皮側(cè)耳CC