非諾貝特治療大鼠非酒精性脂肪肝病的實驗研究.pdf

1、目的：構(gòu)建高脂飲食大鼠非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）模型，探討胰島素抵抗（insulin resistance，IR）、脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)在NAFLD發(fā)病機制中的作用；觀察非諾貝特對NAFLD大鼠IR、脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)的影響及對NAFLD的療效，研究其作用機制，為臨床上非諾貝特治療NAFLD提供理論依據(jù)。 方法：將40只雄性SD大鼠隨機分為兩組：正常飲食組16只

2、，予以普通飼料喂養(yǎng)；高脂飲食組24只，予以高脂飼料（普通飼料+14％豬油+1％膽固醇）喂養(yǎng)。第8周末兩組分別隨機處死8只鑒定成模，稱為8周正常飲食組（normal diet group8weeks，NG8w）和8周高脂飲食組（high fat diet group8 weeks，HG8w）。第9周開始將高脂飲食組剩下的大鼠隨機分為2組：12周高脂飲食組（high fat diet group12 weeks，HG12w）8只及非諾貝特組

3、（Fenofibrate group，F(xiàn)G）8只，正常飲食組剩下的8只稱為12周正常飲食組（normal diet group12 weeks，NG12w），此三組于實驗第12周末處死。FG于實驗第9-12周以非諾貝特20mg/kg·d灌胃；NG12W和HG12W于實驗第9-12周以生理鹽水2mL/d灌胃。所有大鼠處死前隔夜禁食并稱重，每只大鼠經(jīng)門靜脈取血，離心分離血清，用于測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransfer

4、ase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）、甘油三酯（trigly geride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BS）、血清胰島素（fasting insulin，F(xiàn)Ins）、游離脂肪酸（free fatty acids，F(xiàn)FAs）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，T

5、NF-α），計算空腹胰島素抵抗指數(shù)（fastinginsulin resistance index，F(xiàn)IRI）；游離肝臟并稱重，計算肝指數(shù)；取小塊肝組織剪碎，倒入玻璃勻漿器中勻漿，制成10％的肝組織勻漿，用于測定肝勻漿FFAs、TG、TC含量；取大鼠肝右葉組織病理切片，HE染色，評價肝臟脂肪變性程度。RT-PCR半定量方法測定過氧化物酶體增殖物激活受體α（peroxisome proliferator activated recepto

6、r alpha，PPARa，）mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：（1）與同期正常飲食組比較，HG8w和HG12w組大鼠體重、肝指數(shù)、FIns、FIRI、血清ALT、AST、TG、TC、FFAs、TNF-α水平及肝勻漿TG、TC、FFAs均升高，比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（均p<0.05）；FG組大鼠的體重、肝指數(shù)、FIns、FIRI、血清ALT、AST、TC、FFAs、TNF-α水平及肝勻漿TG、TC、FFAs均較HG12w明顯降低、但仍較NG

7、12w升高，比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（均p<0.05），F(xiàn)G組的血清TG水平低于HG12w組，比較有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.05），但與NG12w組比較無統(tǒng)計學(xué)差異；各組大鼠血糖沒有明顯變化（均p>0.05）；（2）與同期正常飲食組比較，HG8w和HG12w組大鼠PPARαmRNA的表達(dá)水平明顯降低，HG12w比HG8w表達(dá)水平更低，而FG組大鼠的肝臟PPARα mRNA的表達(dá)水平較HG12w組高，而較NG12w組低，比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（均p<0

8、.05）；（3）肝組織切片HE染色光鏡下可見，HG8w大鼠肝臟出現(xiàn)大泡性脂肪變性，HG12w大鼠肝臟大泡性脂肪變性呈彌漫性、伴有炎癥細(xì)胞浸潤，F(xiàn)G組大鼠肝小葉內(nèi)仍可見肝細(xì)胞呈大泡性脂肪變性及氣球樣變，但脂肪變性程度較HG12w減輕，偶見炎癥細(xì)胞浸潤；（4）PPARαmRNA表達(dá)與反映IR、脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)的各項指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： 1.持續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠8周可成功構(gòu)建NAFLD模型。 2.非諾貝特對SD