復(fù)方發(fā)酵中草藥對鯉鯽草魚生長非特異性免疫和抗病能力的影響.pdf

1、目的：水產(chǎn)品生產(chǎn)過程中抗生素的大量使用，導(dǎo)致抗生素等藥物殘留問題的日益突出，本文旨在研究抗生素的替代產(chǎn)品多菌種混合復(fù)方發(fā)酵中草藥的最佳工藝條件和其對三種常見淡水魚生長、免疫性能和抗病能力的影響，為綠色水產(chǎn)飼料添加劑和魚病防治藥物的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1采用米曲霉（Aspergillus oryzae）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subitilis）、植物乳酸菌（Lactobacillus plantarum）、產(chǎn)朊假絲

2、酵母（Candida utilis）為復(fù)合發(fā)酵菌種，麩皮、豆粕、中藥（復(fù)方1：黃芪18份，黨參12份，當(dāng)歸10份，白術(shù)8份，茯苓4份，柴胡3份，陳皮3份，山楂4份，麥芽6份，艾葉4份，黃芩6份，板藍(lán)根4份，大黃4份，甘草6份，生姜3份）2：1：7的比例組成發(fā)酵基質(zhì)，以纖維素酶活力為指標(biāo)，先進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，然后，通過正交試驗(yàn)的方法，選擇最優(yōu)發(fā)酵條件組合。
　　2將最優(yōu)發(fā)酵條件下制得的復(fù)方發(fā)酵中草藥應(yīng)用到鯽魚飼料中，采用隨機(jī)分組的方法

3、，挑選澎澤鯽360尾，分成3組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)20尾魚， A組（陰性對照組）僅投喂基礎(chǔ)飼料，B組（陽性中藥對照組）投喂基礎(chǔ)飼料+0.3％的中藥，C組（復(fù)方發(fā)酵中藥組）投喂基礎(chǔ)飼料+0.3%的復(fù)方發(fā)酵中藥，喂養(yǎng)至61d，測定各組澎澤鯽幼魚生長及免疫各項(xiàng)指標(biāo)。
　　3將最優(yōu)發(fā)酵條件下制得的復(fù)方發(fā)酵中草藥應(yīng)用到鯉魚飼料中，挑選鯉魚600尾，按照隨機(jī)數(shù)字分組的方法分為5個處理，每個處理6個重復(fù)，每個重復(fù)20尾魚。分別投喂以下飼料,

4、A陰性對照組：投喂基礎(chǔ)飼料;B陽性中藥對照組：投喂基礎(chǔ)飼料+0.3%的中藥;C復(fù)方發(fā)酵中藥低劑量組：投喂基礎(chǔ)飼料+0.1%的復(fù)方發(fā)酵中藥;D復(fù)方發(fā)酵中藥中劑量組：投喂基礎(chǔ)飼料+0.3%的復(fù)方發(fā)酵中藥;E復(fù)方發(fā)酵中藥高劑量組：投喂基礎(chǔ)飼料+0.5%的復(fù)方發(fā)酵中藥，試驗(yàn)共20d。試驗(yàn)結(jié)束后測定各組黃河鯉幼魚生長及免疫各項(xiàng)指標(biāo)。
　　4在植物原料中依次添加0.11%、0.33%、0.55%、0.77%、1.1%、3.3%、5.5%、8.

5、8%的復(fù)合中藥作為發(fā)酵基質(zhì)，采用米曲霉、枯草芽孢桿菌、植物乳酸菌、產(chǎn)朊假絲酵母為復(fù)合發(fā)酵菌種，測定各組總菌數(shù)、棉酚去除率、硫甙去除率和乳酸含量。確定最適添加量后，采用隨機(jī)分組的方法，挑選草魚600尾，分成5組， K組（陰性對照組）：投喂基礎(chǔ)飼料；L組（陽性中藥組1）：投喂發(fā)酵飼料；M組（陽性中藥組2）：投喂發(fā)酵飼料+0.3%中藥；N組投喂發(fā)酵飼料+0.3%單獨(dú)發(fā)酵的中藥；P組：投喂發(fā)酵飼料+0.3%和發(fā)酵基料混合發(fā)酵的中藥，喂養(yǎng)至60d

6、，測定各組草魚魚種生長及免疫指標(biāo)。
　　5、以復(fù)方中藥為發(fā)酵基質(zhì)，米曲霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和嗜酸乳桿菌作為復(fù)合發(fā)酵菌種，以豆粕、麩皮、復(fù)方中藥（復(fù)方2：大黃100g，板藍(lán)根100g。黃芩50g，黃柏50g，金銀花30g，苦參20g。黃芪，40g，當(dāng)歸，40g，五倍子30g。知母30g。生地400g，玄參，40g，玄明粉40g，甘草15g）1：2：7的比例組成發(fā)酵基質(zhì)。纖維素酶活力和總菌數(shù)為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)的方法

7、，探討多菌種混合復(fù)方發(fā)酵中草藥的最佳工藝條件。挑選規(guī)格整齊，無傷病的澎澤鯽720尾，分成治療群和預(yù)防群，每群按照隨機(jī)數(shù)字分組的方法分為6個處理，每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)20尾魚。預(yù)防群中先投喂基礎(chǔ)飼料或藥餌7天后，按照0.1ml/尾腹腔注射嗜水氣單胞菌感染，治療群先按照0.1ml/尾腹腔注射嗜水氣單胞菌感染，6小時后投喂藥餌或基礎(chǔ)飼料。具體分組為，A陰性對照組：投喂基礎(chǔ)飼料，不感染，注射和試驗(yàn)組菌液同等劑量的生理鹽水；B陽性中藥組1：

8、腹腔注射0.1ml/尾嗜水氣單胞菌感染（以下同）；C陽性對照組2：投喂基礎(chǔ)飼料+2%的中藥，感染；D復(fù)方發(fā)酵中藥低劑量組：投喂基礎(chǔ)飼料+1%的復(fù)方發(fā)酵中藥，感染；E復(fù)方發(fā)酵中藥中劑量組：投喂基礎(chǔ)飼料+2%的復(fù)方發(fā)酵中藥，感染；F復(fù)方發(fā)酵中藥高劑量組：投喂基礎(chǔ)飼料+3%的復(fù)方發(fā)酵中藥，感染。及時統(tǒng)計死亡數(shù)。
　　結(jié)果1自然 PH值，總接種量10%，米曲霉、枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、植物乳酸菌接種比例1:2:1:1的條件下，復(fù)合菌種

9、固態(tài)復(fù)方發(fā)酵中藥的最佳工藝參數(shù)為，發(fā)酵時間84 h，好氧厭氧時間比2:1，初始含水量65%，發(fā)酵溫度為32℃，纖維素酶活力達(dá)到42.37 u/g。
　　2飼喂添加量0.3%的復(fù)方發(fā)酵中草藥飼料后，澎澤鯽體重增長率提高了33.5%，餌料系數(shù)降低了0.06，復(fù)方中藥經(jīng)發(fā)酵后體重增加率相比較未發(fā)酵中藥提高了27.4%，餌料系數(shù)降低了0.07。飼喂60d后，復(fù)方發(fā)酵中草藥 SOD、MDA、LSZ、BUN相比較對照組均具有顯著差異（P<0.

10、05)。
　　3飼喂添加量0.3%的復(fù)方中藥飼料后，黃河鯉體重增長率提高了5.4%，餌料系數(shù)降低了6.0%，復(fù)方中藥經(jīng)發(fā)酵后體重增加率相比較未發(fā)酵中藥提高了11.7%，餌料系數(shù)降低了8.1%；復(fù)方發(fā)酵中草藥0.1%組和中藥0.3%組各項(xiàng)指標(biāo)無顯著差異。復(fù)方發(fā)酵中草藥各試驗(yàn)組均有刺激黃河鯉非特異性免疫，增強(qiáng)抗病能力，促進(jìn)免疫器官發(fā)育的作用，飼喂20d后，復(fù)方發(fā)酵中草藥0.3%和0.5%組SOD、MDA、LSZ、TP、ALB、BUN、

11、脾體指數(shù)相比較對照組均具有顯著差異（P<0.05),復(fù)方發(fā)酵中藥在黃河鯉幼魚飼料中的最適添加量為0.3%。
　　4中藥在0.11%～0.77%的濃度范圍內(nèi)，有利于發(fā)酵過程中乳酸含量提高和棉酚、硫甙的降解，在添加量大于3%時，不利于植物原料的微生物發(fā)酵；植物蛋白原料中添加0.3%的復(fù)合中藥共同發(fā)酵后，相比較對照組，增重率提高了37.8%，餌料系數(shù)降低了17.2%，LSZ、SOD、SBI均有顯著提高（P<0.05)，而MDA、GOT、

12、GPT、Cr則顯著降低（P<0.05)，說明生物發(fā)酵飼料對草魚魚種具有明顯的促生長及提高非特異性免疫、增強(qiáng)抗病能力的作用；中藥和植物原料單獨(dú)發(fā)酵和混合發(fā)酵均對草魚魚種的生長和非特異性免疫能力的提高具有促進(jìn)作用（P<0.05)，但兩者之間沒有顯著差異（P>0.05)。
　　5固態(tài)復(fù)方發(fā)酵中藥（復(fù)方2）的最佳工藝參數(shù)為，發(fā)酵時間72 h，初始含水量60%，總接種量9%，纖維素酶活力達(dá)到15.02 u/g。飼喂添加量2%中藥的飼料后，預(yù)

13、防組澎澤鯽成活率提高了52.5%，治療組提高了35%，相比較等添加量的未發(fā)酵中藥，復(fù)方發(fā)酵中藥預(yù)防組成活率提高了22.5%，治療組提高了30%，復(fù)方發(fā)酵中藥和中藥對嗜水氣單胞菌引起的鯽魚出血病均有明顯的預(yù)防和治療作用（P<0.05），且復(fù)方發(fā)酵中藥使用的效果優(yōu)于未發(fā)酵中藥。
　　結(jié)論1復(fù)方發(fā)酵中草藥（復(fù)方1）能顯著提高常見淡水魚鯉魚、鯽魚和草魚的非特異性免疫能力，促進(jìn)鯉魚、鯽魚和草魚的生長，降低餌料系數(shù),復(fù)方發(fā)酵中草藥在飼料中的最