何首烏組織培養(yǎng)的研究.pdf

1、近年來(lái)，由于自然環(huán)境的破壞、無(wú)計(jì)劃的采挖和栽培技術(shù)等原因，使得何首烏藥用資源的供應(yīng)困難。因此，將何首烏野生變家種勢(shì)在必行，其優(yōu)良種苗選育和繁殖、品質(zhì)的提高便成了重要的研究課題。本文通過(guò)何首烏外植體誘導(dǎo)、愈傷組織的誘導(dǎo)與分化、芽體增殖、生根及移栽、大田定植及何首烏塊根收獲，系統(tǒng)地探討了何首烏的組培快繁以及組培苗的大田栽培性狀。采用HPLC法和分光光度計(jì)法，對(duì)何首烏的四種不同生長(zhǎng)年限的栽培種和一個(gè)云南野生種、五個(gè)不同產(chǎn)地的制首烏中二苯乙烯苷

2、、大黃素、總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定與比較。這些研究為何首烏組織培養(yǎng)快速繁殖、種質(zhì)資源保存及人工栽培提供重要參考依據(jù),對(duì)解決市場(chǎng)需求有重要意義。試驗(yàn)結(jié)果表明: 1.何首烏組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基以MS效果最佳。 2.芽是組織培養(yǎng)快繁的最佳外植體，12min是適宜的滅菌時(shí)間。 3.在何首烏組織培養(yǎng)中，白砂糖的作用與蔗糖相當(dāng)，可替代蔗糖。 4.芽體增殖可作為何首烏組織培養(yǎng)的主要增殖途徑。 5.不同濃度配比的生長(zhǎng)

3、素和細(xì)胞分裂素對(duì)芽體增殖會(huì)產(chǎn)生不同的影響。具體表現(xiàn)為：6-BA和IAA組合中，6-BA1.5mg/L+IAA0.8mg/L的增殖系數(shù)最高，為7.6；6-BA和IBA組合中，6-BA1.5mg/L+IBA0.3mg/L的增殖系數(shù)最高，為8.8；6-BA和NAA組合中，6-BA1.0mg/L+NAA0.025 mg/L的增殖系數(shù)最高，為6.8；6-BA、NAA和IBA組合中，6-BA0.75mg/L+NAA0.01mg/L＋I(xiàn)BA0.1mg

4、/L的增殖系數(shù)最高，為6.4。此外，不同細(xì)胞分裂素對(duì)芽體增殖的影響也不同，6-BA的增殖效果明顯優(yōu)于KT、ZT。因此，芽體增殖的最適培養(yǎng)基激素為6-BA1.5mg/L+IBA0.3 mg/L。 6.不同基本培養(yǎng)基對(duì)芽體增殖影響大小排序?yàn)椋篗S>B5>1/2MS>N6>ER；椰汁對(duì)芽體增殖有一定的促進(jìn)作用。 7.何首烏的莖段和芽的愈傷組織誘導(dǎo)要優(yōu)于葉片和塊根；光培養(yǎng)較暗培養(yǎng)更有利于愈傷組織的誘導(dǎo)；最適愈傷組織誘導(dǎo)的激素搭配

5、是：MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.5mg/L；MS培養(yǎng)基中添加羅漢果汁有利于誘導(dǎo)愈傷組織；不同基本培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織的效果排序：MS>ER>1/2MS>N6>B5。 8.在誘導(dǎo)愈傷組織再分化中，單因子6-BA或6-BA與LFS組合或TDZ與NAA組合均有分化芽產(chǎn)生，最佳激素組合是：TDZ0.3mg/L+NAA0.05mg/L。 9.生根壯苗培養(yǎng)基以1/2MS+IBAO.3mg/L+NAA0.05mg/L＋

6、0.2％的活性炭，生根效果最好；生根所需的白砂糖濃度以2％為最好。 10.煉苗移栽的方法中以不打開(kāi)瓶蓋或打開(kāi)瓶蓋三天再移栽最佳。 11.野生生首烏與組培苗種植的生首烏相比，其總黃酮、二苯乙烯苷、大黃素含量要高。隨著組培苗栽培年份的增加，其生首烏的總黃酮、二苯乙烯苷、大黃素的含量也越隨之提高。五種不同產(chǎn)地的制首烏的總黃酮、二苯乙烯苷含量、大黃素差異較大，以河南，湖南的含量相對(duì)較高，廣西、四川、廣州的含量相對(duì)較低。不同生長(zhǎng)年