奶牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍方法及胚胎程序化冷凍研究.pdf

1、卵母細(xì)胞和胚胎冷凍技術(shù)在家畜遺傳資源保存方面具有廣泛和潛在的應(yīng)用價(jià)值。本試驗(yàn)用OPS管或GMP管對(duì)牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍和用麥管對(duì)胚胎程序化冷凍進(jìn)行研究。在冷凍時(shí)，對(duì)基礎(chǔ)液、不同發(fā)育階段的牛卵母細(xì)胞、保護(hù)劑、冷凍載體、解凍步驟進(jìn)行比較試驗(yàn)。同時(shí)研究三步平衡法和一步細(xì)管法冷凍牛胚胎和移植受胎率效果。 1.基礎(chǔ)液中添加牛血清白蛋白或胎牛血清對(duì)GV期牛卵母細(xì)胞的冷凍效果。凍后對(duì)照組和兩個(gè)試驗(yàn)組形態(tài)正常率分別為45％，65.1％，65.6

2、％，成熟率分別為28％，44.4％，44.20％，卵裂率分別為11.7％,23.8％，21.3％，試驗(yàn)組與對(duì)照組差異顯著，但添加BAS和FCS兩組之間差異不顯著。 2.不同發(fā)育階段的牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍效果。冷凍GV期和MⅡ麓，結(jié)果形態(tài)正常率分別為71.3％和68.8％，差異不顯著(p＞0.05)；成熟率分別為45％和47.6％，差異顯著(p＜0.05)；卵裂率分別為23.3％和31.1％，差異顯著(p＜0.05)。 3

3、.不同顆粒細(xì)胞層數(shù)的牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍效果。裸卵，含2～4層顆粒細(xì)胞，顆粒細(xì)胞完整的卵母細(xì)胞凍后形態(tài)正常率分別為21.7％，60.3％，60.7％，成熟率分別為6.7％，46％，44.2％，卵裂率分別為1.6％，30.2％，24.6％。結(jié)果含2～4層顆粒細(xì)胞的卵母細(xì)胞冷凍效果最好。 4.不同玻璃化冷凍溶液對(duì)OPS法冷凍GV期牛卵母細(xì)胞體外發(fā)育的影響。在EFS30和EFS40液中，凍后形態(tài)正常率分別為67.2％和66.7％，差異

4、不顯著(p＞0.05)；成熟率分剮為36.2％和37.6％，差異不顯著(p＞0.05)。在EDFS30和EDFS40中，凍后形態(tài)正常率分別為73.1％和75.4％，差異不顯著(p＞0.05)；成熟率分別為42.9％和43.7％，差異不顯著(p＞0.05)。而在EFS30液和EDFS30液中，凍后形態(tài)正常率分別為67.2％和73.1％，差異顯著(p＜0.05)；成熟率分別為36.2％和42.9％，差異顯著(p＜0.05)，EFS40與ED

5、FS40在影響成熟率上差異也顯著。 5.不同玻璃化冷凍溶液對(duì)GMP法冷凍GV期牛卵母細(xì)胞體外發(fā)育的影響，在EFS30和EFS40液中，凍后形態(tài)正常率分別為63.5％和63.9％，差異不顯著(p＞0.05)；成熟率分別為33.7％和36.1％，差異不顯著(p＞0.05)；在EDFS30液和EDFS40液中，凍后形態(tài)正常率分別為78.6％和75％，差異不顯著(p＞0.05)；成熟率分別為43.8％和47.6％，差異不顯著(p＞0.0

6、5)。EDFS30和EDFS40均是牛GV期卵母細(xì)胞良好的玻璃化冷冷凍液。 6.采用OPS法和GMP法冷凍牛GV期卵母細(xì)胞，在EFS40中凍后形態(tài)正常率分別為68.4％和74.1％，差異不顯著(p>0.05)；成熟率分別為47.3％和48.4％，差異不顯著(p>0.05)；在EDFS40液中冷凍后形態(tài)正常率分別為74.6％和75.4％，差異不顯著(p>0.05)；成熟率分別為42.4％和49.1％，差異不顯著(p>0.05)；O

7、PS管和GMP管都是比較理想的冷凍載體。 7.不同解凍程序?qū)ΣＡЩ鋬龅呐Ｂ涯讣?xì)胞發(fā)育影響。采用EFS30玻璃化冷凍液，OPS法冷凍GV期牛卵細(xì)胞，通過(guò)一步法，三步法，五步法解凍，形態(tài)正常率分別為32.3％,51.7％，49.1％，成熟率分別為25.4％,43.4％,36.7％，卵裂率分別為18.7％，30％，29.8％，三步解凍法效果較好。 8.程序化冷凍牛胚胎移植效果。采用三步平衡法和一步細(xì)管法，結(jié)果顯示，用10％甘