拮抗細(xì)菌P-161對(duì)溫室甘藍(lán)枯萎病的防效及發(fā)酵條件的研究.pdf

1、北京市農(nóng)林科學(xué)院植環(huán)所從京郊菜園土壤中分離到一株拮抗細(xì)菌，代號(hào)P一16l。初步試驗(yàn)證明其有較好的生防潛力。本文從菌株的拮抗性、對(duì)甘藍(lán)枯萎病的溫室防效、菌株的鑒定、搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化和發(fā)酵液基本理化特性等方面進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。主要結(jié)論如下。 1．對(duì)峙培養(yǎng)結(jié)果表明，P-161菌株對(duì)供試的甘藍(lán)枯萎病菌等16種植物病原真菌的抑菌帶均較明顯，抑菌帶寬度達(dá)6.6mm～12.5mm，說(shuō)明P-161菌株對(duì)這些病原真菌都具有明顯

2、的抑制作用。其中P-16l菌株對(duì)甘藍(lán)枯萎病菌的抑菌帶寬度達(dá)8.3mm，辣椒炭疽病菌抑制作用最強(qiáng)，抑菌帶寬度達(dá)12.5mm；P-161菌株對(duì)玉米大斑病菌、小麥紋枯病菌、桃褐腐病菌和茄子早疫病菌的抑菌帶都在9.0mm以上，抑菌效果較為理想。溫室試驗(yàn)結(jié)果表明，P-161菌株對(duì)甘藍(lán)枯萎病于12天和20天的防治效果分別為96.25％和74.89％，對(duì)甘藍(lán)枯萎病的控制作用是非常有效的，其結(jié)果較為理想。 2．根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》(第9版，

3、1994)和《微生物分類學(xué)》的有關(guān)細(xì)菌分類鑒定標(biāo)準(zhǔn)，綜合分析評(píng)價(jià)P-161菌株的菌體形態(tài)、培養(yǎng)特征、生物學(xué)性狀及生理生化性質(zhì)，與芽孢桿菌菌種的檢索表及相關(guān)特征比較，P-161菌株與枯草芽孢桿菌的主要鑒別特征基本一致，符合枯草芽孢桿菌在分類地位上的基本要求。由此，初步將P-161菌株鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。 3．經(jīng)試驗(yàn)證明，P-161菌株對(duì)引起黃瓜、甘藍(lán)和西瓜枯萎病的尖孢鐮刀菌的抑制大體上是由競(jìng)爭(zhēng)

4、作用和拮抗作用所致。其中較為重要的是P-161菌株通過(guò)分泌某種拮抗物質(zhì)造成病原菌孢子萌發(fā)受抑制、畸形；菌絲溢縮變細(xì)、菌體內(nèi)涵物泄漏中空甚至徹底崩解。P-161菌株對(duì)病原菌的競(jìng)爭(zhēng)作用是很明顯的，它可能在實(shí)際控病中起到重要作用。 4．本研究采用均勻設(shè)計(jì)與正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，最終明確了P-161菌株最合適的產(chǎn)抗培養(yǎng)基及工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)抗培養(yǎng)基的配方為：牛肉膏1％，葡萄糖1.3％，蛋白胨1.9％，酵母粉0.2％，NaCl 0.6％；工

5、業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：玉米粉1.2g，豆餅粉3.0g，K<,2>HPO<,4>·3H<,2>O 0.4g。明確了P-161菌株最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件為：種齡21-24h，接種量5％，初始pH 6，溫度35℃，瓶裝量50ml/500ml，搖床轉(zhuǎn)速180r/min，發(fā)酵周期72h。通過(guò)對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選及培養(yǎng)條件的優(yōu)化，相比原始發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵液抑菌活性及活菌體均有顯著的提高。 5．P-161菌株產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)在不同光、熱、酸、堿環(huán)境