ER應激在卵巢癌順鉑耐藥中的作用研究.pdf

1、目的：
　　 旨在探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在卵巢癌順鉑化療耐藥中的作用及其調(diào)節(jié)的分子機制，從而探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在卵巢癌順鉑耐藥中的作用，為臨床研發(fā)有效逆轉卵巢癌順鉑耐藥的新方法開辟新思路。
　　 方法：
　　 本研究通過Western免疫印跡法檢測SKOV3和SKOV3/DDP細胞中GRP78蛋白的表達以及不同濃度沙奎那韋作用后SKOV3細胞GRP78蛋白的表達。通過RT-PCR法及Western免疫印跡法檢測不同藥物對SK

2、OV3細胞mTOR、Beclin1 mRNA及蛋白表達的影響。采用MTT法測定SKOV3細胞的順鉑IC50值以及不同劑量沙奎那韋對卵巢癌SKOV3順鉑敏感性的影響，通過3-MA抑制細胞自噬后，觀察其對SKOV3細胞順鉑敏感性的影響。
　　 結果：
　　 1.SKOV3/DDP細胞中GRP78蛋白表達量比SKOV3細胞增高28.58％，差異有統(tǒng)計學意義（t=5.304，P=0.006）。
　　 2.不同濃度沙奎那韋

3、作用SKOV3細胞后，GRP78蛋白表達量隨著沙奎那韋濃度的增大逐漸增加。實驗分為4組，沙奎那韋10μmol/l、沙奎那韋20μmol/l、沙奎那韋40μmol/l組與對照組。其中沙奎那韋10μmol/l、沙奎那韋20μmol/l、沙奎那韋40μmol/l組與對照組相比，GRP78蛋白分別增高了23.48％、35.39％、41.46％，各實驗組GRP78蛋白表達量不同，有統(tǒng)計學意義（F=136.791，P=0.000），所有組間的表達差

4、異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 3.沙奎那韋可以降低SKOV3細胞對順鉑的敏感性。SKOV3細胞順鉑IC50值為5.49μg/ml，沙奎那韋10μmol/l、20μmol/l作用后，順鉑IC50值為11.199μg/ml、14.906μg/ml，敏感性分別降低了1.04倍、1.72倍。
　　 4.實驗分為對照組、沙奎那韋組、LY294002組、DDP組、沙奎那韋+DDP組，mTOR mRNA在SKOV3細胞中的表

5、達量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對照組。mTOR mRNA在各實驗組間的表達量不同，有統(tǒng)計學意義（F=613.061，P=0.000）。Beclin1 mRNA在SKOV3細胞中的表達量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對照組。Beclin1 mRNA在各實驗組間的表達量不同，有統(tǒng)計學意義(F=4002.353，P=0.000)。
　　 5.實驗分為對照組

6、、沙奎那韋組、LY294002組、DDP組、沙奎那韋+DDP組，mTOR蛋白在SKOV3細胞中的表達量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對照組。mTOR蛋白在各實驗組間的表達量不同，有統(tǒng)計學意義（F=42.959，P=0.000）。Beclin1蛋白在SKOV3細胞中的表達量依次為沙奎那韋+DDP組＞沙奎那韋組＞LY294002組＞DDP組＞對照組。Beclin1蛋白在各實驗組間的表達量不同，有統(tǒng)計學意

7、義(F=105.629，P=0.000)。
　　 6.3-MA作用于細胞后，沙奎那韋對SKOV3細胞順鉑敏感性增強。3-MA抑制細胞自噬后，沙奎那韋10μmol/l、20μmol/l組順鉑IC50值為6.6236μg/ml、7.8884μg/ml。
　　 結論：
　　 1、誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可導致卵巢癌SKOV3順鉑敏感性下降。
　　 2、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可能通過mTOR、Beclin1途徑上調(diào)細胞自噬、進而導致細