米根霉產(chǎn)L-乳酸優(yōu)良菌株的同步輻射誘變選育及發(fā)酵特性研究.pdf

1、米根霉發(fā)酵產(chǎn)L-乳酸具有營(yíng)養(yǎng)要求簡(jiǎn)單、產(chǎn)品光學(xué)純度高等優(yōu)點(diǎn),但也存在產(chǎn)量不高、副產(chǎn)物含量較多等不足,因此優(yōu)良菌株的誘變選育具有一定的現(xiàn)實(shí)意義.同步輻射軟X射線具有能譜寬且連續(xù)、精確可調(diào)、單色性好、可精確計(jì)算輻照劑量等特點(diǎn),可提供生物分子所具有的Ck、Nk、Ok波長(zhǎng)的射線,在生物學(xué)領(lǐng)域有著廣泛的用途.本文采用同步輻射2.3nm、3.2nm、4.4nm波長(zhǎng)軟X射線對(duì)米根霉As3.819孢子進(jìn)行輻射誘變,結(jié)果表明:抽真空時(shí)間對(duì)米根霉孢子的存活

2、率有很大影響,時(shí)間越短存活率越高;Ck軟X射線誘變存活率最低,篩選得到的突變株最少,主要產(chǎn)生在高劑量區(qū);Nk效果較好,突變株產(chǎn)生在低劑量區(qū);Ok誘變存活率最高,篩選得到的突變株最多,在不同劑量范圍內(nèi)均有產(chǎn)生,誘變效果最佳. 采用YPD平板.大平皿點(diǎn)樣.乳酸平板篩選得到3株突變株,經(jīng)過發(fā)酵驗(yàn)證確定C-60為最優(yōu)突變株.通過單因素和正交試驗(yàn),優(yōu)化C-60突變株的發(fā)酵培養(yǎng)基組成,確定其最佳培養(yǎng)基組成為:120 g/L葡萄糖、1 g/L

3、,硫酸銨、0.3 g/L硫酸鎂、0.3 g/L磷酸二氫鉀、0.44 g/L硫酸鋅.在此條件下C-60突變株發(fā)酵72h后乳酸產(chǎn)量為98.4 g/L,乙醇產(chǎn)量為5.1 g/L,斜面轉(zhuǎn)接7代后其搖瓶產(chǎn)乳酸能力基本穩(wěn)定. 比較C-60突變株與出發(fā)菌株5L罐發(fā)酵的結(jié)果發(fā)現(xiàn):突變株乙醇脫氫酶活力為14U/ml,降低了26.3﹪,乙醇產(chǎn)量為5.2 g/L,減少了23.8﹪;乳酸脫氫酶活力為17U/ml,提高了6.3﹪,乳酸產(chǎn)量為98.1g/L