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文檔簡介
1、近年來,現(xiàn)代分析技術(shù)尤其是液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)得到了迅速發(fā)展。其在天然藥物化學、藥物分析、藥物篩選及中藥現(xiàn)代化等領(lǐng)域的廣泛應用均極大地促進了相關(guān)學科的發(fā)展。本文以乙酰膽堿酯酶抑制劑為研究對象,發(fā)展了基于固定化酶的乙酰膽堿酯酶抑制劑體外篩選模型和基于液質(zhì)聯(lián)用分析的乙酰膽堿酯酶抑制劑的快速篩選方法。為我國藥用生物的真?zhèn)舞b別和活性成分快速發(fā)現(xiàn)研究提供了方法學參考。主要研究內(nèi)容及結(jié)果簡述如下:
1.以可重復使用的固定化
2、酶代替游離態(tài)酶,建立一種基于比色分析的乙酰膽堿酯酶抑制劑(AChEIs)體外篩選模型。采用以氨基化硅膠為載體固定的AChE,首先對實驗條件進行優(yōu)化,并用AChEIs陽性對照物他克林和毒扁豆堿對篩選模型進行驗證,還對篩選模型技術(shù)參數(shù)進行評價,最后將新方法用于單體化合物及天然產(chǎn)物粗提物AChE抑制活性評價。結(jié)果表明,方法驗證及篩選模型技術(shù)參數(shù)評價結(jié)果良好,篩選模型對AChEIs篩選有較好的特異性和靈敏度,可以用于AChEIs的篩選。該方法具
3、有適用性強、篩選結(jié)果可靠、固定化酶可以重復使用等優(yōu)點,是單體化合物及天然產(chǎn)物粗提物AChEIs活性評價的有效方法。
2.首次建立了液相-離子阱質(zhì)譜法(LC-ESI-Trap/MS)篩選乙酰膽堿酯酶抑制劑(他克林和毒扁豆堿)的新方法。首先,發(fā)展適用于他克林和毒扁豆堿的色譜、質(zhì)譜分析方法,接著對抑制劑洗脫條件進行了系統(tǒng)優(yōu)化,并在此基礎(chǔ)上探索性的發(fā)展了基于靶酶親和分離-液質(zhì)聯(lián)用分析篩選、鑒別乙酰膽堿酯酶抑制劑的新方法。其次,采用本研
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