Graves甲亢肝損害與抗原肽運(yùn)載體1基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)性的研究.pdf

1、第一部分 Graves'disease甲亢肝損害臨床分析 目的:了解GD甲亢肝損害發(fā)生的相關(guān)因素和肝損情況及與甲狀腺功能的相關(guān)性,尋求甲亢肝損的特異表現(xiàn),以便更好的防治GD甲亢肝損害.方法:GD甲亢病例分為肝功異常組和肝功正常組,比較二組一般資料,游離甲狀腺激素水平,肝功水平等.結(jié)果:①甲亢肝損害與性別、甲腫程度及發(fā)生率、突眼與否及陽性家族史之間均無相關(guān)性;②肝功異常組的FT4水平明顯高于肝功正常組,但二者相關(guān)性并不強(qiáng)(OR=1.010

2、);③肝功異常以谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高常見(70％以上),而直接膽紅素升高幅度較大(10倍以上);④肝功異常組的房顫發(fā)生率高(p=0.026).結(jié)論:GD甲亢患者不論甲功水平如何均要注意肝臟、心臟、腎臟等其它臟器的功能水平.這些臟器的損害是由于甲狀腺激素的毒性作用還是與自身免疫有關(guān)是一個值得討論的問題.第二部分 ARMS-PCR方法檢測SNP基因多態(tài)性與單核苷酸多態(tài)性 SNP即為基因發(fā)生了點突變,研究已知突變的方法有雜交法(allele-spe

3、cific oligonucleotide,ASO)、擴(kuò)增法(ARMS、RFLP-PCR、LCR)及錯配修復(fù)酶裂解法(mismatch repair enzyme cleavage,MREC)等.研究已知突變的方法中ASO、MREC和LCR(ligation chain reaction)法均需要設(shè)計、合成相應(yīng)的探針,一個等位基因至少就需要4種探針作點雜交,還需要有相應(yīng)可檢測的放射性核素或免疫熒光等標(biāo)記.這些方法成本較高,操作煩瑣,分析

4、條件嚴(yán)格.限制性內(nèi)切酶酶切長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)法為基因位點的突變引起某區(qū)域限制性內(nèi)切酶識別位點的消失或產(chǎn)生新的識別位點,表現(xiàn)出限制性片斷長度的多態(tài)性;在目的基因片段PCR擴(kuò)增后,利用多種限制性內(nèi)切酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切分型;不同的基因序列,不同的限制性內(nèi)切酶酶切擴(kuò)增產(chǎn)物,電泳后產(chǎn)生不同的電泳圖譜,通過對電泳圖譜的分析,得出HLA基因多態(tài)性結(jié)果;該法簡單、敏

5、感、準(zhǔn)確、無需同位素,但較ARMS-PCR來說仍嫌煩瑣,且分辨率低.ARMS-PCR可在PCR后直接進(jìn)行電泳分型,無需酶切,且一個位點僅擴(kuò)增一管既可確定其等位基因型.故ARMS-PCR以其可靠、敏感、簡便、快速、價廉、無需同位素、熒光標(biāo)記等優(yōu)點為廣大研究者們所接受.第三部分 Graves甲亢肝損害與TAP1基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)性的研究 目的:探討抗原肽運(yùn)載體1(TAP1)基因在天津地區(qū)漢族人中的分布及其與Graves病、GD甲亢肝損害的關(guān)聯(lián)性

6、.方法:用擴(kuò)增阻礙突變體系(ARMS)檢測TAP1基因多態(tài)性位點在106例天津地區(qū)漢族正常人、66例GD肝功正?；颊?、66例GD肝功異常患者中的分布.結(jié)果:(1)研究人群的TAP1等位基因分布、基因型分布均符合Harding-Weinberg定律;(2)天津地區(qū)漢族人TAP1 333和TAP1 637基因型、等位基因型、表現(xiàn)型頻率在正常人與GD肝功異?；颊摺D肝功正?；颊唛g無顯著性差異(P>0.05),按性別、年齡分層后仍無顯著性差異

7、;TAP1單倍體型在三組間亦無顯著性差異;(3)天津地區(qū)漢族人TAP1 333和TAP1 637基因型、等位基因型、表現(xiàn)型頻率在正常人與GD白細(xì)胞減少患者、GD白細(xì)胞正?；颊唛g無顯著性差異(P>0.05);(4)天津地區(qū)漢族人TAP1 333和TAP1 637基因型、等位基因型、表現(xiàn)型頻率在正常人與GD突眼患者、GD無突眼患者間無顯著性差異(P>0.05).結(jié)論:TAP1基因型不能作為預(yù)測中國天津漢族人發(fā)生GD與GD肝損、突眼、白細(xì)胞減