甘藍(lán)醛還原酶基因克隆及其功能分析.pdf

1、醛酮還原酶是NAD(P)H依賴型的氧化還原酶超家族的成員之一，可以催化許多羰基化合物的還原。本研究利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增了甘藍(lán)BoAKR1、BoAKR2、BoAKR3、BoAKR4、BoAKR5和BoAKR6共6個基因的開放閱讀框序列。序列分析結(jié)果表明：BoAKR1的開放閱讀框序列為948 bp，編碼315個氨基酸，其預(yù)測分子量為35.1283 KDa，理論等電點6.61；BoAKR2的開放閱讀框序列為948 bp，編碼315個氨基酸

2、，其預(yù)測分子量為35.2804 KDa，理論等電點5.77；BoAKR3的開放閱讀框序列為948 bp，編碼315個氨基酸，其預(yù)測分子量為35.1884 KDa，理論等電點6.11；BoAKR4的開放閱讀框序列為933 bp，編碼310個氨基酸，其預(yù)測分子量為34.6679 KDa，理論等電點6.61；BoAKR5的開放閱讀框序列為906bp，編碼301個氨基酸，其預(yù)測分子量為33.6625 KDa，理論等電點5.94；BoAKR6的開

3、放閱讀框序列為936 bp，編碼311個氨基酸，其預(yù)測分子量為34.5305 KDa，理論等電點5.94。氨基酸序列一致性分析結(jié)果表明甘藍(lán)BoAKRs與十字花科山萮菜屬Eutrema salsugineum，鹽芥屬小鹽芥 Thellungiella halophila，薺菜屬Capsella rubella，擬南芥Arabidopsis thaliana和A. lyrata subsp. Lyrata的AKRs氨基酸序列相似性達(dá)到82％

4、~93%，這說明了AKRs在十字花科植物中是高度保守的。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，BoAKR1~BoAKR6與AKR4C亞家族成員聚為一支，這說明了BoAKRs屬于AKR4C亞家族。利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測了甘藍(lán)BoAKR1~BoAKR6基因的表達(dá)水平，結(jié)果表明甘藍(lán)在小菜蛾取食為害過程中BoAKR1基因的表達(dá)量在2 h達(dá)到峰值，4 h之后表達(dá)水平逐漸降低，對照組該基因的表達(dá)量較低；而其它5個基因，實驗組與對照組無顯著差異。這說明了小菜蛾取