白藜蘆醇抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞株生長的機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究白藜蘆醇對人胃癌SGC-7901細(xì)胞生長增殖的影響，進(jìn)而探討白黎蘆醇抗腫瘤活性的相關(guān)機(jī)制。 方法: 體外常規(guī)培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞SGC-7901, MTT法檢測白藜蘆醇和GW9662(PPAR-γ特異阻斷劑)對SGC-7901細(xì)胞的增殖抑制作用,流式細(xì)胞儀測定對細(xì)胞周期的影響，RT- PCR方法檢測PPAR-γ、Cyclin D1、VEGF的mRNA表達(dá)，Western blot檢測PPAR-γ蛋白的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測

2、CyclinD1、VEGF蛋白表達(dá)的改變。 結(jié)果: (1) MTT實驗結(jié)果顯示：用不同濃度(25, 50, 75, 100 μmol/L)的白藜蘆醇處理人胃癌SGC-7901細(xì)胞24、48、72h后，白藜蘆醇呈時間、濃度依賴性地抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長，而在48h，不同濃度(25, 50, 75, 100 μmol/L)的白藜蘆醇+10μmol/L GW9662處理組與相同濃度的白藜蘆醇組相比，其抑制率顯著下降(P<0

3、.05)。（2）流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)(0，50,100 μmol/L)白藜蘆醇作用48h后，細(xì)胞生長被阻滯在G1期，隨著濃度增加，G1期細(xì)胞所占百分率增加，同時伴隨著S期細(xì)胞比例減少，G2期指數(shù)無明顯變化，而100 μmol/L的白藜蘆醇+10μmol/L GW9662處理組與100 μmol/L的白藜蘆醇組相比，抑制作用明顯下降(P<0.05)。(3)胃癌SGC-7901細(xì)胞存在PPAR-γmRNA 和蛋白的表達(dá)，白藜蘆醇呈濃度依賴性的

4、激活PPAR-γ mRNA的轉(zhuǎn)錄。 25, 50, 75, 100μmol/L 白藜蘆醇作用于胃癌細(xì)胞48h后,細(xì)胞中PPAR-γmRNA相對表達(dá)分別是空白對照組的122.2％,195.1％, 232.9％和277.1％ (P<0.05)，100μmol/L 白藜蘆醇 +10μmol/L GW9662處理的癌細(xì)胞PPAR-γ mRNA相對表達(dá)是空白對照組的261.1％，與100μmol/L的白藜蘆醇處理組相比有顯著差異(P<0.05)。

5、而總體PPAR-γ蛋白的表達(dá)幾乎沒有變化。(4)胃癌SGC-7901細(xì)胞高水平表達(dá)Cyclin D1，白藜蘆醇顯著的抑制Cyclin D1的表達(dá)(P<0.05)。經(jīng)25, 50, 75, 100 μmol/L白藜蘆醇處理48h后, Cyclin D1 mRNA抑制率分別為11.3％, 24.3％, 35.4％, 59.5％；而100μmol/L 白藜蘆醇 +10μmol/L GW9662處理組Cyclin D1 mRNA抑制率為40.7

6、％。經(jīng)0, 50, 100μmol/L白藜蘆醇處理48h后, Cyclin D1蛋白相對灰度值分別為77.57±1.15，54.43±1.78 ，28.91±2.21，而100μmol/L 白藜蘆醇 +10μmol/L GW9662處理組相對灰度值為40.56±1.84。100μmol/L白藜蘆醇處理組和100μmol/L白藜蘆醇+10μmol/L GW9662處理組相比，抑制作用有顯著差異(P<0.05)。(5)胃癌SGC-7901細(xì)

7、胞高水平表達(dá)VEGF，白藜蘆醇顯著的抑制VEGF的表達(dá)(P<0.05)。經(jīng)25, 50, 75, 100 μmol/L白藜蘆醇處理48h后,VEGF mRNA抑制率分別為分別11.2％, 21.8％, 27.6％, 49.6％，而100μmol/L白藜蘆醇+10μmol/L GW9662處理組VEGF mRNA抑制率為39.0％。經(jīng)0, 50, 100 μmol/L白藜蘆醇處理48h后, VEGF蛋白相對灰度值為72.58±1.08,

8、48.51±0.96, 20.62±0.94，而100μmol/L白藜蘆醇+10μmol/L GW9662處理組相對灰度值為33.49±1.01。100μmol/L白藜蘆醇處理組和100μmol/L白藜蘆醇+10μmol/L GW9662處理組相比，抑制作用有顯著差異(P<0.05)。 結(jié)論: 白藜蘆醇在胃癌SGC-7901細(xì)胞中部分的通過激活PPAR-γ抑制Cyclin D1、VEGF的表達(dá)，使癌細(xì)胞停留在G1期，抑制細(xì)胞的增