云南騰沖火山地質(zhì)公園和熱海公園根瘤菌遺傳多樣性的研究.pdf

1、從云南騰沖熱泉公園的豆科植物截葉胡子草、雞眼草、含羞草決明、波葉山螞蝗、野大豆、兔尾草、豬屎豆、西南杭子梢、小雀花、茸毛木藍(lán)和騰沖火山口的豆科植物雞眼草、含羞草決明、波葉山螞蝗、兔尾草、多花木藍(lán)共分離根瘤菌67株，采用16S rDNA PCR-RFLP、ERIC-PCR、16S rDNA、持家基因(atpD、recA、glnⅡ)、共生基因(nifH、nodC)研究了這些根瘤菌的遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育。
　　16S rDNA PCR-

2、RFLP和ERIC-PCR研究結(jié)果表明，從云南騰沖采集的豆科植物中分離得到的根瘤菌存在明顯的遺傳多樣性。供試菌株的16S rDNA PCR產(chǎn)物的HaeⅢ酶切有12種圖譜類(lèi)型，HinfⅠ有12種圖譜類(lèi)型，MspⅠ有14種圖譜類(lèi)型，TaqⅠ有9種圖譜類(lèi)型，供試菌株共有18種16S rDNA酶切遺傳圖譜類(lèi)型;ERIC-PCR聚類(lèi)結(jié)果在69％相似水平上將供試菌株分成3個(gè)表觀群:根瘤菌屬Rhizobium(19個(gè))、慢生根瘤菌屬Bradyrhiz

3、obium(44個(gè))、4個(gè)菌株單獨(dú)成群，慢生根瘤菌屬于優(yōu)勢(shì)種群。
　　根據(jù)16S rDNA PCR-RFLP和ERIC-PCR的聚類(lèi)結(jié)果，選取32株代表菌株，采用16S rDNA序列、持家基因(atpD、recA、glnⅡ)序列、共生基因(nifH、nodC)序列對(duì)代表菌株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育的研究。
　　16S rDNA序列分析揭示代表菌株分布在Rhizobium(7個(gè))、Bradyrhizobium(18個(gè))、Herbaspir

4、illum(2個(gè))、Burkholderia（4個(gè)）、Labrys(1個(gè))5個(gè)系統(tǒng)發(fā)育分支中。分離自雞眼草的根瘤菌全部位于Bradyrhizobium分支上，分離自熱泉公園含羞草決明的菌株Q63-2和豬屎豆的菌株Q47-1位于Herbaspirillum分支上，熱泉公園的含羞草的菌株Q63-3、波葉山螞蝗的菌株Q8-2、茸毛木藍(lán)的菌株Q57-3和火山口的多花木藍(lán)的菌株H15-2、兔尾草的菌株H5-1位于Burkholderia分支上，分

5、離自火山口的多花木藍(lán)H17-2位于Labrys。持家基因atpD、recA、glnⅡ的序列分析中，18個(gè)Bradyrhizobium屬的菌株和4個(gè)Rhizobium(Q23-2、H20-3、Q16-1、Q57-1)在屬的水平上與16S rDNA一致;一些β-rhizobia的持家基因在PCR擴(kuò)增中并沒(méi)有獲得其片段，菌株H17-2的持家基因的分析結(jié)果表明H17-2位于Bradyrhizobium分枝上不同于16S rDNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育

6、樹(shù)。綜合16S rDNA和持家基因(atpD、recA、glnⅡ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù):菌株H10-1、H17-2、H8-1、H8-5、H19-2、Q99-1與B.japonicum親緣關(guān)系最近，菌株Q78-3、Q25-1、H23-2、Q94-4、Q2-2、Q1-1的分類(lèi)地位與B.elkanii親緣性最近，菌株Q79-3、Q22-4、Q66-3、Q66-6、Q49-3與B.liaoningense親緣性最近，菌株Q50-4與Q57-1的分類(lèi)地

7、位與R.leguminosarum親緣關(guān)系最近，H20-3和Q23-2的分類(lèi)地位與R.tropici親緣性最近，菌株Q16-1的分類(lèi)地位與R.tibeticum親緣關(guān)系最近，而菌株Q8-2、Q17-2、Q8-3、Q47-1、Q63-1、Q63-2、Q63-3、Q57-3分類(lèi)地位并不能確定。共生基因nifH的序列分析中，慢生根瘤菌屬菌株的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系與持家基因和16S rDNA類(lèi)似，而在Herbaspirillum、Rhizobium、B