低分子肝素抗炎性凝血效應(yīng)對膿毒癥大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用.pdf

1、[目的]
　　 1.動態(tài)觀察盲腸結(jié)扎穿孔(cecal ligation puncture，CLP)膿毒癥模型大鼠肺組織高遷移率族蛋白B1(high mobility group boxl portein，HMGB1)mRNA和蛋白表達(dá)水平，研究低分子肝素對肺組織HMGB1基因和蛋白表達(dá)的影響，探討低分子肝素對膿毒癥大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制，為膿毒癥患者器官功能保護(hù)提供新的理論依據(jù)
　　 2.觀察低分子肝素對膿

2、毒癥大鼠血漿TNF-α及IL-6的含量的影響，探討低分子肝素對膿毒癥早晚期炎癥釋放的作用。
　　 [方法]
　　 144只SPF級雄性成年SD大鼠(體重200～220g)被隨機(jī)分為假手術(shù)組(48只)、盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)后常規(guī)治療組(48只)及常規(guī)加低分子肝素治療組(48只)，分別施以假手術(shù)(A組)或CLP(B組和C組)。A組開腹后輕拉盲腸后將其回納腹腔，逐層縫合腹壁，其余各組均采用CLP術(shù)制作大鼠膿毒癥模型術(shù)后立即

3、腹腔注射生理鹽水(NS)2ml+頭孢曲松(30mg/kg)(A、B組)；生理鹽水(NS)2 ml+頭孢曲松(30mg/kg)+低分子肝素(150 U/kg)(C組)。以術(shù)后3、6、12、18、24、48小時(shí)為觀察點(diǎn)，觀察各組大鼠術(shù)后活動、進(jìn)食、豎毛、腹瀉、眼球凹陷、呼吸等情況；于各觀察點(diǎn)每組隨機(jī)處死大鼠5只，每組留18只不殺用以觀察5天生存率。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)測肺組織HMGB-1mRNA的表達(dá)；采用Weste

4、rn blot法檢測肺組織HMGB-1蛋白的表達(dá);采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿TNF-α及IL-6的含量;用分光光度比色法檢測肺組織髓過氧化物酶(myeloperoxidese,MPO)；熱干法稱取肺組織濕重/干重比值(Wetweight/Dry weight)；并在活殺前行膿毒癥大鼠評分。觀察低分子肝素對膿毒癥大鼠嚴(yán)重程度評分、生存時(shí)間、血漿TNF-α及IL-6的含量、肺組織HMGBI mRNA與蛋白表達(dá)、MPO活性以及WW/DW比值的

5、影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.A組各時(shí)間點(diǎn)膿毒癥評分差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C組膿毒癥評分較A組同期水平明顯升高(P＜0.01)，從6h開始增高，24h達(dá)到高峰并維持至48h，48h評分仍顯著高于組內(nèi)6h(P＜0.05)；C組各時(shí)間點(diǎn)評分均顯著低于B組同期水平(P＜0.05)。A、B、C組半數(shù)生存時(shí)間依次為120h、20.4h、28h；A、B、C兩兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.A組各

6、時(shí)間點(diǎn)大鼠HMGBlmRNA和HMGB1蛋白均有微量表達(dá)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。B、C組HMGB1mRNA和HMGB1蛋白從6h開始表達(dá)增多，以12～24h為顯著，48h開始下降但仍高于A組。C組同期水平較B組低(P＜0.05)，但仍比A組高且有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.A組大鼠血漿TNF-α水平在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)差異無顯著性，B組大鼠血漿TNF-α水平于術(shù)后6h達(dá)到峰值，12h開始明顯下降，24 h逐漸恢

7、復(fù)至3h水平。C組各時(shí)間點(diǎn)血漿TNF-α水平低于B組(P＜0.05)，但仍顯著高于A組(P＜0.05)。A組大鼠血漿IL-6水平在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)差異無顯著性，B組大鼠血漿IL-6水平于術(shù)后3h達(dá)到峰值，18h開始明顯下降，24 h逐漸恢復(fù)至3h水平。C組各時(shí)間點(diǎn)血漿IL-6水平低于B組(P＜0.05)，但仍顯著高于A組(P＜0.05)。
　　 4.A組各時(shí)間點(diǎn)MPO活性無明顯差異，B組CLP后3小時(shí)MPO活性開始升高，24h達(dá)峰值

8、，48h開始有所回落，但與A組同期水平差異仍有顯著性(P＜0.05)，C組較B組同期水平低(P＜0.05)，但較A組顯著升高(P＜0.05)。
　　 5.A組肺組織WW/DW比值較B、C低，差異有顯著性(P＜0.05)，C組比值介于A組與B組之間，各組組間差異具顯著性(P＜0.05)。
　　 6.光鏡下B組肺組織可見明顯急性肺損傷表現(xiàn)：充血、水腫、炎癥細(xì)胞浸潤；C組較B組病理損傷明顯減輕，且肺損傷病理評分明顯降低(P＜0

9、.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.低分子肝素能夠抑制CLP引起的膿毒癥過程中的早晚期炎癥介質(zhì)釋放。
　　 2.低分子肝素能夠顯著抑制膿毒癥大鼠肺組織HMGB1蛋白及mRNA水平表達(dá)；通過抑制肺組織HMGB1，下調(diào)膿毒癥大鼠肺組織MOP活性，減輕肺組織PMN浸潤，減緩CLP誘導(dǎo)的肺損傷程度，提高膿毒癥大鼠的生存率。
　　 3.低分子肝素對膿毒癥引起的肺損傷的保護(hù)作用可能是通過其抗炎性凝血效應(yīng)對凝血—炎癥