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1、目的:建立谷氨酸所致海馬神經(jīng)元損傷模型,觀察重組腺病毒-心肌營養(yǎng)素1(Adv-CT1)對損傷神經(jīng)元存活的保護作用,為神經(jīng)損傷提供新的治療措施。 方法: 1)以人胚腎293細胞為包裝細胞,擴增Adv-CT1;應(yīng)用免疫組化技術(shù)鑒定Adv-CT1,用TCID50(tissue culture infectious dose 50,50%組織培養(yǎng)感染劑量)方法檢測其滴度。 2)在原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中分別加入不同濃度的谷
2、氨酸(50、100、200、400 μmol/L),用臺盼藍染色法檢測存活率,TUNEL細胞凋亡技術(shù)檢測凋亡率,評定谷氨酸對海馬神經(jīng)元的損傷作用。 3)Adv-CT1轉(zhuǎn)染神經(jīng)元后,谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡,觀察CT-1對損傷神經(jīng)元的保護作用,并觀察Caspase-3(cysteinyl aspartate specific protease-3,半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-3)基因在損傷神經(jīng)元表達。 結(jié)果: 1)擴
3、增出病毒滴度為10<'8>-10<'9>pfu/ml的重組腺病毒-心肌營養(yǎng)素-1。 2)不同濃度的谷氨酸(50、100、200、400 μmol/L)作用于海馬神經(jīng)元后,可引起以下改變:a.臺盼藍染色顯示谷氨酸能顯著降低海馬神經(jīng)元的存活率,不同濃度的谷氨酸組與對照組比較差異均有顯著性(P<0.01),而且隨著谷氨酸濃度的升高,神經(jīng)元的存活率也逐漸降低;b.TUN-E1灤色顯示谷氨酸能誘導(dǎo)細胞凋亡,與對照組比較差異有顯著性(P<0
4、.01),在濃度為50、100 μmol/L時,細胞凋亡率隨著濃度的升高而升高,在濃度超過100 μmol/L時,細胞凋亡率隨著濃度的升高而降低。 3)Adv-CT1轉(zhuǎn)染神經(jīng)元后,50 μmol/L谷氨酸作用于神經(jīng)元,結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染AdV-CT1的細胞存活率明顯高于未轉(zhuǎn)染組,細胞凋亡率明顯低于未轉(zhuǎn)染組,Caspase-3陽性率明顯低于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。 結(jié)論:Adv-CT1對損傷神經(jīng)元有保護作用,其機制可能是通過
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