銀杏外種皮多糖的提取純化及一級(jí)結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、多糖(polysaccharides，PS)是自然界中含量最豐富的一類多聚合物，而植物活性多糖不僅具有多方面的生物學(xué)功能，更是有多種藥理活性，比如能夠誘導(dǎo)體內(nèi)免疫物質(zhì)的產(chǎn)生，提高機(jī)體的免疫作用，抑制腫瘤的生長和擴(kuò)散，降低血糖和血脂等，所以近年來多糖成為天然藥物研究的熱點(diǎn)之一。多糖是一種非細(xì)胞的毒性物質(zhì)，作為藥物應(yīng)用的最大優(yōu)點(diǎn)是毒副作用較少，且其來源比較廣泛；因此，活性多糖既可以作為一類理想而有效的藥物，也可以作為人們的保健食品。

2、　　 銀杏是一種古老的孑遺植物?？梢哉f它渾身都是寶，集食用、藥用、材用、綠化等多種用途于一體，它的葉、果實(shí)、花粉和外種皮等皆具有藥用開發(fā)價(jià)值，是世界上珍貴的藥用植物，因此可稱之為“全身都是寶的活化石”。中國不但是銀杏的故鄉(xiāng)，而且是世界銀杏資源中心，世界上超過90％的銀杏白果都是來自中國，一直以來白果都是我國一種重要的出口創(chuàng)匯產(chǎn)品；據(jù)調(diào)查，截止到目前，全國有將近三十個(gè)省(市)都有銀杏的種植，銀杏的核用栽培已然成為我國銀杏產(chǎn)區(qū)的支柱產(chǎn)業(yè)。

3、據(jù)估計(jì)，我國銀杏白果的年產(chǎn)量在1.3萬噸左右，而銀杏外種皮約占銀杏果實(shí)的70％，即我們每年將有大約3萬噸的新鮮銀杏外種皮被廢棄，這不僅造成了銀杏資源的巨大浪費(fèi)，而且造成了環(huán)境的嚴(yán)重污染。
　　 銀杏外種皮多糖(Ginkgo biloba exocarp polysaccharides，GBEP)是從銀杏果實(shí)的外種皮中提取后獲得的一種活性多糖。銀杏外種皮是加工白果后的廢棄物，有研究發(fā)現(xiàn)銀杏外種皮中的多糖含量比較高，約含10％以上，

4、并且具有抗癌、調(diào)節(jié)免疫力、抵抗衰老、降低血脂、止咳等多種功能，所以把銀杏外種皮多糖作為藥物或者保健食品的一種中間體產(chǎn)品，則能變廢為寶，對(duì)農(nóng)業(yè)資源中銀杏外種皮的綜合及合理利用和環(huán)境的保護(hù)意義重大。
　　 通觀銀杏外種皮多糖的各種文獻(xiàn)報(bào)道，其研究還基本停留在對(duì)多糖的提取、分離及純化、對(duì)分子量的測(cè)定、藥理活性以及單糖成分等的初級(jí)研究階段，對(duì)銀杏外種皮多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)研究尚未見報(bào)道；文獻(xiàn)資料表明多糖的生物活性與它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)是密切相關(guān)的，

5、一級(jí)結(jié)構(gòu)又是進(jìn)一步深入研究多糖的特異性和構(gòu)效關(guān)系以及藥效學(xué)機(jī)理的基礎(chǔ)。所以本課題以銀杏外種皮為實(shí)驗(yàn)材料，研究了銀杏外種皮多糖的提取工藝及含量測(cè)定方法、分離純化水溶性銀杏外種皮多糖，并對(duì)該多糖的糖鏈的分子量、糖殘基之間的連接方式和順序等一級(jí)結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行研究，為更好的研究銀杏外種皮多糖的生物學(xué)活性奠定一定的理論基礎(chǔ)，為銀杏外種皮在多糖領(lǐng)域的深入開發(fā)及研究提供一條全新的途徑。本課題的主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　 1對(duì)銀杏外種皮多糖提

6、取工藝的研究。常規(guī)的熱水浸提法來提取GBEP，將其濾液濃縮后用乙醇沉淀得銀杏外種皮粗多糖。優(yōu)選提取工藝，最佳的提取條件是：料液比為1:10、水煮時(shí)間2h、提取次數(shù)3次、溫度為95℃。得咖啡色粉末即銀杏外種皮多糖，其得率約為9.41g/100g。
　　 2苯酚-硫酸法測(cè)定銀杏外種皮多糖的含量。單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上來優(yōu)選測(cè)定條件：硫酸用量為4ml、苯酚溶液1.2ml(質(zhì)量分?jǐn)?shù)5％)、顯色溫度為30℃、顯色時(shí)間為20min。硫酸用量是影響

7、顯色的一個(gè)關(guān)鍵因素，用該方法測(cè)得的銀杏外種皮多糖含量為44.15％。
　　 3銀杏外種皮多糖的重醇沉純化。將大批量提取后的粗多糖再次溶于水，進(jìn)行重醇沉純化；通過對(duì)料液比、時(shí)間、溫度等因素的考察來確定多糖得率最高的重醇沉條件。即：抽濾后未干燥多糖以1:3的比例直接溶于水，冷凝回流裝置95℃攪拌溶解2h，多糖得率為75.2％。
　　 4銀杏外種皮多糖的脫色及脫蛋白。用雙氧水對(duì)多糖進(jìn)行脫色，溫度為40℃，時(shí)間3h，雙氧水加量0