應(yīng)用微陣列技術(shù)研究乳腺癌HER-2基因狀態(tài)和蛋白的表達(dá).pdf

1、目的： 應(yīng)用組織微陣列組（Tissue Microarray Group TMAG）和細(xì)胞核微陣列（Nucleus Microarray NMA）技術(shù)，通過免疫組化（Immunohistochemistry IHC）和熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）分別檢測(cè)乳腺癌組織中HER-2基因狀態(tài)和蛋白表達(dá)，觀察兩種檢測(cè)結(jié)果相互關(guān)系及臨床意義。 材料和方法：

2、1．研究材料：收集沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院2006年6月～2008年8月診斷明確的乳腺癌標(biāo)本，共248例，均為女性，年齡31～84歲，平均48．3歲。 2．制作TMAG和IHC染色：將來(lái)源不同的（TissuemicroarrayTMA）切片排列在同一張載玻片上，同時(shí)縮小相鄰組織芯的距離，增加組織芯的數(shù)量，制成TMAG。采用S-P法進(jìn)行IHC染色。IHC染色結(jié)果參照美國(guó)FDA標(biāo)準(zhǔn)：光鏡下觀察以細(xì)胞膜棕黃染色為陽(yáng)性，分為IHC-～+++。結(jié)果

3、判斷以IHC+++為陽(yáng)性，-～++級(jí)染色為陰性。 3．制作NMA和FISH染色：對(duì)石蠟包埋組織進(jìn)行較厚的切片，經(jīng)脫蠟及消化，從中提取出完整的細(xì)胞核。將提取細(xì)胞核的懸液滴注在預(yù)制的石蠟?zāi)？字?，然后?xì)胞核固定、脫蠟便制成細(xì)胞核微陣列。NMA較好的適用于熒光原位雜染色。FISH探針為混合探針，標(biāo)記整個(gè)HER-2基因序列為橙色熒光；另一個(gè)標(biāo)記17號(hào)染色體著絲?；蛐蛄袨榫G色熒光。檢測(cè)結(jié)果是列出20個(gè)間期細(xì)胞核中HER-2拷貝數(shù)與著絲粒的

4、比率，乳腺癌HER-2擴(kuò)增的病例橙色熒光與綠色熒光信號(hào)比率大于或等于2．0；正常的細(xì)胞核兩種信號(hào)比率小于2．0；結(jié)果在臨界點(diǎn)（1．8～2．2）時(shí)應(yīng)視為可疑。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：兩種方法檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析用SPSS11．5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行x2檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1．IHC檢測(cè)結(jié)果：248例乳腺癌標(biāo)本中，IHC-為90例，IHC+為49例，IHC++為37例，IHC+++為72例。根據(jù)IHC結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)，陽(yáng)性72例，陰性1

5、76例，陽(yáng)性率為29．0%。 2．FISH檢測(cè)結(jié)果：248例乳腺癌病理標(biāo)本中，F(xiàn)ISH陰性172例，F(xiàn)ISH陽(yáng)性76例，F(xiàn)ISH陽(yáng)性率為30．6%。 3．IHC與FISH的結(jié)果比較：在IHC+++的72例中，有59例為FISH陽(yáng)性；IHC-～++的176例標(biāo)本中，有159例為FISH陰性。IHC與FISH檢測(cè)結(jié)果總符合率為87．9%，IHC與FISH檢測(cè)結(jié)果兩者之間存在顯著性相關(guān)性。IHC++與FISH檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯相關(guān)

6、性（P>0．01）。 4．17號(hào)染色體單體型染色體與多倍體型IHC++中4例為17號(hào)染色體單體型染色體，其FISH檢測(cè)均為陽(yáng)性，占FISH陽(yáng)性病例總數(shù)5．26%。IHC+++中5例17號(hào)染色體多倍體型染色體，F(xiàn)ISH檢測(cè)均為陰性，占FISH陰性總例數(shù)2．9%。 結(jié)論： 1．TMAG和NMA技術(shù)適用于乳腺癌組織的IHC和FISH檢測(cè)。同樣具有結(jié)果同一性好、準(zhǔn)確和低成本的優(yōu)點(diǎn)。 2．乳腺癌IHC為-～+和++

7、+情況時(shí)，IHC與FISH檢測(cè)結(jié)果有良好的一致性。 3．乳腺癌IHC++時(shí)，需進(jìn)行FISH檢測(cè)HER-2基因狀態(tài)，同時(shí)要排除是否為17號(hào)染色體單倍體，避免不必要的靶向治療。 本研究的創(chuàng)新之處1本實(shí)驗(yàn)把TMAG/NMA技術(shù)應(yīng)用到普通石蠟包埋乳腺癌組織的IHC和FISH檢測(cè)，拓展了乳腺癌檢測(cè)條件。 2．提出IHC++病例進(jìn)行FISH檢測(cè)，區(qū)分17號(hào)染色單倍體以免造成不必要靶向藥物治療。 本研究存在的不足：本實(shí)